[發明專利]對真性紅細胞增多癥中JAK2突變的鑒定

有效

• 申請號: 200580042022.3
• 申請日: 2005-10-26
• 公開（公告）號: CN101072870A
• 公開（公告）日: 2007-11-14
• 發明（設計）人: 威廉·瓦因切克爾;瓦萊麗·于戈;克洛艾·詹姆斯;讓－皮埃爾·勒·庫埃迪克;妮科爾·卡薩德瓦爾
• 申請（專利權）人: 巴黎國立醫院（AH－HP）;國家健康與醫學研究院（INSERM）;古斯塔夫魯西研究所（IGR）;凡爾賽大學;巴黎十一大
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12Q1/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉曉東;顧晉偉

1.一種包含617位氨基酸上突變的分離的JAK2蛋白質(Janus 激酶2)，其中所述617位氨基酸上的突變是由纈氨酸到苯丙氨酸的 V617F突變，在以下被稱為“JAK2V617F變體”，它的序列顯示在SEQ? ID?No?1中。

2.編碼根據權利要求1的JAK2V617F變體的核苷酸序列。

3.權利要求2的核苷酸序列，其中所述序列是SEQ?ID?No?2。

4.克隆和/或表達載體，其是病毒或質粒載體或者裸DNA形式， 其特征在于，它包含在哺乳動物細胞中的有效的啟動子控制下的根據權 利要求2或3的序列。

5.一種表達根據權利要求1的重組JAK2V617F變體的哺乳動物 細胞。

6.一種制備表達根據權利要求1的重組JAK2V617F的非人轉基 因動物的方法，其中所述非人轉基因動物是通過同源重組或定向重組在 其基因組中整合有JAK2V617F的編碼序列的小鼠或者大鼠。

7.根據權利要求6的方法，其中所述非人轉基因動物是JAK2 V617F/JAK2V617F純合體或者JAK2V617F/JAK2雜合體，所述動物 出現由JAK2V617F誘導的真性紅細胞增多癥和/或骨髓增生綜合征。

8.包含序列SEQ?ID?No?3或4的10至30個連續核苷酸并且包含 從標志轉錄起始的ATG開始算起的t1849突變核苷酸的探針或者引物。

9.根據權利要求8的探針或引物，其選自SEQ?ID?No?5至11和12 所示序列。

10.至少10個核苷酸的寡核苷酸，所述寡核苷酸能夠與包含從標志 轉錄起始的ATG開始算起的t1849突變寡核苷酸的序列ID?No.4的JAK2 基因組DNA、cDNA或mRNA雜交。

11.權利要求10的寡核苷酸，其長度為15～25個核苷酸。

12.特異性地識別JAK2V617F變體的單克隆抗體。

13.產生根據權利要求12的抗體的雜交瘤。

14.一種用于檢測腫瘤中JAK2V617F變體的試劑盒，其包含一種 或多種引物或探針，用于特異性地檢測JAK2基因中G1849T突變的存 在與否。

15.權利要求14的試劑盒，其中所述引物或探針為權利要求8至 11中定義的引物或探針。

16.一種用于確定患者是否患有真性紅細胞增多癥或涉及JAK2 V617F變體的任何其它骨髓增生綜合征的試劑盒，其包含一種或多種權 利要求8至11中定義的探針或引物，用于特異性地檢測JAK2基因中 G1849T突變的存在與否。

17.權利要求16的試劑盒，其中所述其它骨髓增生綜合征選自紅細 胞增多癥、白細胞增多癥、血小板增多癥或骨髓纖維化癥。

18.根據權利要求14至17中任一項的試劑盒，其還包含至少一種 選自以下的成分：用于PCR擴增的耐熱性聚合酶、一種或多種用于擴 增和/或雜交步驟的溶液和任何允許檢測標記物的試劑。

19.一種用于確定患者是否患有真性紅細胞增多癥或涉及JAK2 V617F變體的任何其它骨髓增生綜合征的試劑盒，其包含根據權利要求 12的抗體。

20.一種能夠使JAK2V617F變體的表達降低超過50％或超過95％ 的siRNA，其特征在于，它選自以下序列：

-UGGAGUAUGUUUCUGUGGA(SEQ?ID?No?29)，

-GGAGUAUGUUUCUGUGGAG(SEQ?ID?No?30)，或

-GAGUAUGUUUCUGUGGAGA(SEQ?ID?No?31)。