[發明專利]基于轉錄干擾基因沉默的雙雜交系統

無效

• 申請號: 200580040309.2
• 申請日: 2005-10-24
• 公開（公告）號: CN101065668A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: A·福爾尼爾;R·貝倫斯;S·班迪拉
• 申請（專利權）人: 艾文蒂斯藥品公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;C12N15/65;C12N15/81;C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉維升;林森

1.含有干擾DNA構建體的細胞，所述構建體包含：

-置于第一個啟動子控制下的報告基因，

-一個或多個誘導型啟動子，即所謂的干擾啟動子，將其選擇和定位以使得它的激活會參與第一個啟動子的轉錄干擾，導致報告基因表達的可檢測的降低，

所述細胞另外表達：

-第一種嵌合蛋白(Y-AD)，其由與蛋白Y融合的轉錄激活域(AD)形成，所述蛋白Y能與伴侶蛋白X相互作用，

-第二種嵌合蛋白(X-DBD)，其由與第二個結構域融合的第一個DNA-結合域(DBD)形成，所述第二個結構域由能與蛋白Y相互作用的蛋白X形成，兩種嵌合蛋白X-DBD和Y-AD的相互作用，會導致激活干擾啟動子的功能性轉錄因子的形成。

2.如權利要求1所述的細胞，其特征在于，調節報告基因的表達的啟動子是誘導型啟動子，蛋白Y能與兩種伴侶蛋白X和Z相互作用，且所述細胞表達第三種嵌合蛋白(Z-DBD)，其由與第二個結構域融合的DNA-結合域(DBD)形成，所述第二個結構域由能與蛋白Y相互作用的蛋白Z形成，兩種嵌合蛋白Z-DBD和Y-AD的相互作用，會導致激活報告基因的表達的功能性轉錄因子的形成。

3.如權利要求2所述的細胞，其特征在于，調節報告基因的表達的誘導型啟動子包含能與嵌合蛋白(Z-DBD)的DNA-結合域(DBD)相互作用的序列。

4.如權利要求1所述的細胞，其特征在于，調節報告基因的表達的啟動子是組成型啟動子。

5.如權利要求1-4中的任一項所述的細胞，其特征在于，宿主細胞被干擾DNA構建體和編碼嵌合蛋白的DNA構建體所轉化或轉染，所有這些構建體由一個或多個非整合裁體攜帶。

6.如權利要求1-4中的任一項所述的細胞，其特征在于，宿主細胞被編碼嵌合蛋白的DNA構建體所轉化或轉染，這些構建體由一個或多個非整合裁體攜帶，且所述干擾DNA構建體整合在細胞的基因組中。

7.如權利要求1-4中的任一項所述的細胞，其特征在于，所述干擾DNA構建體和編碼嵌合蛋白的DNA構建體整合在細胞的基因組中。

8.如權利要求6或7所述的細胞，其特征在于，所述干擾DNA構建體整合在沒有干擾基固組轉錄活性的基因座中。

9.如權利要求1-8中的任一項所述的細胞，其特征在于，它選自哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞和酵母細胞。

10.如權利要求1-9中的任一項所述的細胞，其特征在于其涉及酵母細胞。

11.如權利要求1-10中的任一項所述的細胞，其特征在于其涉及釀酒酵母Saccharomyces?cerevisiae、栗酒裂殖酵母Schizosaccharomyces?pombe、乳酸克魯維酵母Kluyveromyces?lactis、巴斯德畢赤酵母Pichia?pastoris、卡氏酵母Saccharomycescarlsbergensis或白色假絲酵母Candida?albicans種的酵母。

12.如權利要求1-11中的任一項所述的細胞，其特征在于，至少一個干擾啟動子位于報告基因和第一個啟動子的下游，且與第一個啟動子的方向相反(DI)。

13.如權利要求1-11中的任一項所述的細胞，其特征在于，至少一個干擾啟動子位于報告基因和第一個啟動子的下游，且與第一個啟動子的方向相同(nDI)。

14.如權利要求1-11中的任一項所述的細胞，其特征在于，至少一個干擾啟動于位于報告基因和第一個啟動子的上游，且與第一個啟動子的方向相同(UI)。

15.如權利要求1-11中的任一項所述的細胞，其特征在于，至少一個干擾啟動子位于第一個啟動子和報告基因的兩側，該干擾啟動子位于第一個啟動子和報告基因的下游，具有相對于第一個啟動子會聚性的方向，且該干擾啟動子位于第一個啟動子和報告基因的上游，具有與第一個啟動子相同的方向(UDI)。