[發明專利]DNA收集粘貼片及從其中分離DNA的方法

無效

• 申請號: 200580039972.0
• 申請日: 2005-10-05
• 公開（公告）號: CN101065500A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: 柳在松;劉容佶
• 申請（專利權）人: 遺傳子銀行株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京中海智圣知識產權代理有限公司
• 代理人: 曾永珠

技術領域

本發明涉及一種用于DNA收集的粘貼片及用其提取DNA的方法，更具體地說，涉及一種DNA收集粘貼片及用其有效地收集DNA的方法，該粘貼片能夠在不使用血液或頭發的情況下方便地分離粘附于人皮膚的角蛋白，以便收集人的基因并使用PCR技術擴增基因，從而鑒別親生子女和調查犯罪。

背景技術

一般來說，DNA(脫氧核糖核酸)，人體中含有遺傳信息的分子，儲存于23對人染色體中。就遺傳信息而言，DNA由編碼蛋白質的外顯子和非編碼區的內含子組成。內含子區域，尤其是ALU序列，對個體具有特定的重復結構，這取決于其遺傳譜系。正是由于這個原因，人們采用基因指紋圖譜來篩選分散于基因組的相近或相同的序列，即微衛星或VNTR(數目可變的串聯重復序列)。

目前，在從人體收集DNA方面，已經公開了使用血液或頭發的方法。然而，這些方法存在一些問題。此類技術的過程比較復雜，而且通常讓人感到不舒服。

此外，還開發了用于DNA收集的粘貼片來采集易于從人體脫落的皮膚角蛋白。由于將含有DNA的角蛋白從粘貼片的粘性成分中專門提取出來很難，常規粘貼片有問題。具體地說，當分離DNA時，粘合劑在正常情況下可與DNA凝聚，因為粘合劑的有效成分是類似DNA的聚合物。

因此，本發明人演示了通過涂上韓國專利申請第2000-74853號(以下稱為“常規發明”)中的涂劑溶液制備的粘貼片，該涂劑溶液包含EDTA(乙二胺四乙酸)、Tris和SDS(十二烷基磺酸鈉)。所得到的粘貼片可以專門從人體皮膚角蛋白收集DNA。然后，使用酚提取法從粘貼片分離DNA產物。遺憾的是，即使使用粘貼片和酚提取法，該方法也并未令人滿意地提高DNA產率(與常規方法相比)。

發明內容

技術問題

為了解決上述問題，本發明人成功地提出了以下發明。本發明的一個目的是提供用于DNA收集的粘貼片，該粘貼片可提高DNA產率。

本發明的另一個目的是提供使用DNA收集粘貼片來有效地純化DNA的方法，該方法有利于方便地分離粘附于人皮膚的角蛋白，以獲得人類基因。

技術解決方案

確切地說，本發明包括以下幾個步驟：(1)制備粘貼片；(2)從人皮膚收集角蛋白；(3)純化DNA；(4)通過進行PCR來擴增DNA；(5)鑒別個體的多種基因和遺傳信息。

為了達到本發明的目的，在從人體收集用于分析基因的角蛋白前，貼上并揭開粘貼片，該粘貼片通過涂上包含EDTA(乙二胺四乙酸)、Tris和SDS(十二烷基磺酸鈉)和Peyonine的涂劑溶液制備。然后，將所得到的粘貼片與涂劑溶液在30～45℃下反應40～80分鐘。反應后，加入蛋白酶K并在40～68℃下反應30～100分鐘。

使用本發明的DNA收集粘貼片分離DNA的方法包括以下步驟：

I)在人用商品化粘貼片的一面涂上涂劑溶液，以制備DNA收集粘貼片，該涂劑溶液包含0.05～1mol?EDTA(pH?8.0)、0.002～0.015mol?Tris(pH?8.0)、30～40vol％SDS(約1～1.4mol)和3％Peyonine；

ii)在人皮膚上貼上并揭開粘貼片，以收集人角蛋白；

iii)加入蛋白沉淀劑以從所得到的角蛋白純化DNA；

iv)進行PCR以擴增所得到的DNA；

v)檢查PCR產物以鑒定DNA樣本中的各種基因和遺傳信息。

有利效果

如上所述，根據本發明的DNA收集粘貼片及用其收集DNA的方法，其優點是能夠在不使用血液或頭發的情況下容易地分離粘附于人皮膚的角蛋白。進一步地，本發明能夠方便地分離人類基因并使用PCR技術擴增基因。所以，本發明可達到鑒別親生子女、調查罪犯等效果。因此，DNA收集粘貼片及用其收集DNA的方法可以在遺傳工程領域進行工業應用。

附圖說明

通過下面結合附圖進行的詳細描述將更清楚地理解本發明的上述和其它目的、特點和其它優點。所附圖形包括：

圖1顯示了從粘貼片中分離DNA的過程的示意圖。

圖2對比顯示了從本發明的粘貼片和常規粘貼片制備DNA的PCR產物的產率。

圖3對比顯示了從本發明的粘貼片使用蛋白質沉淀劑分離DNA制備的PCR產物和通過酚提取分離DNA制備的PCR產物。

具體實施方式

下面根據以下步驟更清楚地說明本發明。

步驟1：制備DNA收集粘貼片