[發明專利]嵌合噬菌體衍生的顆粒，它們的制造方法和用途

無效

• 申請號: 200580039274.0
• 申請日: 2005-09-19
• 公開（公告）號: CN101068567A
• 公開（公告）日: 2007-11-07
• 發明（設計）人: 約瑟夫·米蘭德·斯圖里諾
• 申請（專利權）人: 科·漢森有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;C12N1/06;C12N7/00;C07K14/01;C12P1/04;C07K14/19
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

1.一種包含嵌合噬菌體衍生的顆粒的組合物的制備方法，所述方法包括：向安全的宿主細胞引入(例如，通過轉染、感染和/或轉化)一個或多個遺傳要素，其單獨或組合對噬菌體衍生的顆粒進行編碼。

2.權利要求1的制備包含嵌合噬菌體衍生的顆粒的方法，其中，所述安全的宿主細胞選自由其使用經美國食品和藥品管理局、獸用醫藥中心評價為公認安全(GRAS)的細菌，并根據歐洲食品和飼料培養物協會和國際乳制品聯盟(EFFCA/IDF)，是具有在食物中使用無副作用歷史記錄的微生物的細菌組成的組。

3.制備包含嵌合噬菌體衍生的顆粒(例如，嵌合噬菌體顆粒、嵌合的噬菌體樣顆粒或嵌合噬菌體菌影顆粒)的方法，所述顆粒含有至少兩種不同表面展示蛋白，所述方法包括以下步驟：

(i)獲得至少兩種遺傳要素，其中至少一種所述遺傳要素(原生遺傳要素)包括相當部分的噬菌體基因組，其中至少一種其他的所述遺傳要素(反式互補遺傳要素)編碼至少一種成分(附加成分)的合成，該至少一種成分在組裝和/或釋放顆粒的過程中被引導至所述顆粒的表面；

(ii)用所述兩個或多個遺傳要素轉染、感染和/或轉化適合的細菌宿主細胞，所述宿主細胞是安全的宿主細胞(例如選自由其使用經美國食品和藥品管理局、獸用醫藥中心評價為公認安全(GRAS)的細菌，并根據歐洲食品和飼料培養物協會和國際乳制品聯盟(EFFCA/IDF)，是具有在食物中使用無副作用歷史記錄微生物的細菌組成的組；

(iii)在允許由所述原生遺傳要素編碼的噬菌體結構蛋白進行表達的條件下，以及所述至少一種在組裝和/或釋放顆粒的過程中被引導至所述顆粒的表面附加成分進行表達的條件下，培養所述細菌宿主細胞；

(iv)在一定條件下，所述細菌宿主細胞的培養物形成顆粒，該顆粒包含至少一種由反式互補遺傳要素編碼的附加成分，但不包含由反式互補遺傳要素編碼的所述至少一種附加成分的至少一部分的編碼序列；以及

(v)獲得包含嵌合噬菌體衍生的顆粒的組合物。

4.根據上述權利要求的方法，其中，所述遺傳要素通過以下方法被引入到宿主細胞中，該方法包括以下步驟：

(i)用至少一種反式互補遺傳要素轉染、感染和/或轉化適合的細菌宿主細胞；

(ii)用所述原生遺傳要素轉染、感染和/或轉化宿主細胞。

5.根據上述權利要求中任一項的方法，其中，用所述兩種或多種遺傳要素于所述適合的細菌宿主細胞的轉化包含細胞融合。

6.根據上述權利要求中任一項的方法，其中，所述嵌合噬菌體衍生的顆粒包含若干正常(例如2個，3個或多個野生型的)噬菌體成分。

7.根據上述權利要求中任一項的方法，其中，所述原生遺傳要素在該方法中復制。

8.根據上述權利要求中任一項的方法，其中，所述成分是融合蛋白，其中，所述融合蛋白是在編碼指導融合蛋白到所述嵌合噬菌體衍生的顆粒表面的蛋白或肽的序列和不相關的肽或蛋白編碼序列之間的翻譯融合。

9.根據上述權利要求中任一項的方法，其中，所述至少一種其他遺傳要素是選自由質粒、轉位子、原噬菌體、原噬菌體殘體、假噬菌體、附加體和噬粒組成的組的遺傳要素。

10.根據上述權利要求中任一項的方法，其中，所述至少兩種遺傳要素中的至少一種遺傳要素通過噬菌體感染轉移到所述細菌宿主細胞中。

11.根據上述權利要求中任一項的方法，其中，所述細菌宿主細胞是選自由其使用已通過美國食品和藥品管理局、獸用醫藥中心評價為公認安全(GRAS)的并批準用于食品、飼料或直接飼喂微生物制品的添加劑的細菌宿主細胞組成的組。

12.根據上述權利要求的方法，其中，所述細菌宿主細胞就其在奶制食物產品中的應用而言是被認為GRAS的。

13.根據權利要求1-10中任一項的方法，其中，所述細菌宿主細胞是選自由細菌組成的組，其中，所述細菌是根據歐洲食品和飼料培養物協會和國際乳制品聯盟(EFFCA/IDF)的、具有用于食物而無副作用的記錄歷史的微生物。

14.根據上述權利要求中任一項的方法，其中，宿主細胞是選自乳酸菌組。