[發明專利]用于從穩定劑中純化核酸的組合物和方法

有效

• 申請號: 200580038182.0
• 申請日: 2005-11-03
• 公開（公告）號: CN101124321A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發明（設計）人: R·J·貝爾;K·E·保爾森
• 申請（專利權）人: 恰根北美控股有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 余穎

1.一種從含有RNA的測試樣品中分離基本上純和未降解的RNA的方法，該方法包括：

(a)使樣品與增溶溶液接觸，該增溶溶液含有pH約為7-9的緩沖液、堿、兩親試劑；

(b)將該樣品與pH約大于7的緩沖裂解溶液接觸，得到分離樣品，其中該裂解溶液含有絡合鹽；

(c)將分離樣品與固相載體接觸，使分離樣品中含有基本上未降解RNA的核酸結合到該固相載體；

(d)用一種或多種洗滌溶液洗滌該固相載體，除去除結合于固相載體的含有基本上未降解RNA的核酸之外的其它物質；和

(e)從該固相載體上洗脫該結合的基本上未降解的RNA，獲得基本上純和未降解的RNA。

2.一種從含有DNA的測試樣品中分離DNA的方法，該方法包括：

(a)將樣品與含有pH約為7-9的緩沖液、堿和兩親試劑的增溶溶液接觸；

(b)使該樣品與pH約大于7的緩沖裂解溶液接觸，產生分離樣品，其中該裂解溶液含有絡合鹽；

(c)使該分離樣品與(i)含有緩沖液、鋰鹽和兩親試劑的結合溶液，或(ii)含有鋰鹽和醇的洗滌溶液接觸，得到結合樣品；

(d)使該結合樣品與固相載體接觸，使結合樣品中含有基本上未降解DNA的核酸結合到該固相載體；

(e)用一種或多種洗滌溶液洗滌該固相載體，除去除結合于固相載體的含有基本上未降解DNA的核酸之外的物質；和

(f)從該固相載體上將所述結合的基本上未降解的DNA洗脫，獲得基本上純且未降解的DNA。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述測試樣品是沉淀。

4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液中的緩沖液是Tris?HCl。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液中緩沖液的濃度約為10-20mM。

6.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液中堿的濃度約為20-50mM。

7.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液還含有兩親試劑。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述兩親試劑是去污劑。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述去污劑是非離子、陰離子、陽離子或兩性離子去污劑。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述非離子去污劑選自Tween類、Triton類、Tergitols、Nonidets或Igepal。

11.如權利要求10所述的方法，其特征在于，所述去污劑的濃度約為5-15％。

12.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液還含有螯合劑。

13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述螯合劑是乙二胺四乙酸(EDTA)。

14.如權利要求13所述的方法，其特征在于，所述螯合劑的濃度約為1-20mM。

15.一種從含有RNA的測試樣品中分離基本上純和未降解的RNA的方法，該方法包括：

(a)使測試樣品與胍鹽穩定劑和醇接觸

(b)離心該測試樣品，形成粗的裂解物沉淀和上清液；

(c)除去上清液；

(d)使該粗的裂解物與pH約大于7的緩沖裂解溶液接觸，得到分離樣品，其中該裂解溶液含有絡合鹽；

(e)將分離樣品與固相載體接觸，使分離樣品中含有基本上未降解RNA的核酸結合到該固相載體；

(f)用一種或多種洗滌溶液洗滌該固相載體，除去除結合于固相載體的含有基本上未降解RNA的核酸之外的物質；和

(g)從該固相載體上洗脫該結合的基本上未降解的RNA，獲得基本上純和未降解的RNA。

16.如前述任一項權利要求所述的方法，其特征在于，所述裂解溶液還含有緩沖液、兩親試劑和絡合鹽，但不含有強離液物質。

17.如權利要求16所述的方法，其特征在于，所述離液物質是胍鹽和/或脲。

18.如權利要求16所述的方法，其特征在于，所述緩沖液是Tris-HCl。