[發明專利]制備黃原膠生物聚合物的方法

無效

• 申請號: 200580037785.9
• 申請日: 2005-11-01
• 公開（公告）號: CN101061230A
• 公開（公告）日: 2007-10-24
• 發明（設計）人: 克萊雷·特隆多·文德路斯科洛;阿熱利塔·濟韋拉·莫雷拉;喬·路易斯·席爾瓦·文德路斯科洛
• 申請（專利權）人: 佩洛塔斯聯邦大學;巴西農牧研究企業
• 主分類號: C12P19/06
• 分類號: C12P19/06
• 代理公司: 北京中博世達專利商標代理有限公司
• 代理人: 申健

1.一種制備黃原膠生物聚合物的方法，其中所述的方法包括下列步驟：

a)提供預先生長在固體培養基中的或已凍干的樹生黃單胞菌和/或樹生黃單胞菌李屬致病變種的分離菌落；

b)通過將所述的菌落加入適宜的細胞生長培養基來制備初始的預接種物，并將菌落以100至250rpm的轉速并在20℃至30℃之間的溫度以及在pH?4.5至9.0的條件下溫育24h或48h(即步驟110)，其中所述的培養基包含3至55g.L^-1的蔗糖或葡萄糖、1.0至37g.L^-1的蛋白胨、10至20g.L^-1瓊脂、0.03至0.90g.L^-1的K₂HPO₄以及0.001至2.5g.L^-1的MgSO₄和/或復合維生素B；

c)將初始的預接種物導入含有下列成分的液體培養基：3至55g.L^-1的蔗糖或葡萄糖、1.0至37g.L^-1的蛋白胨、0.03至0.90g.L^-1的K₂HPO₄和0.001至2.5g.L^-1的MgSO₄和/或復合維生素B，然后將菌落以100至250rpm的轉速在20℃至35℃的溫度和pH?4.5至9.0的條件下溫育24h或48h，并在溫育期之后獲得最終液體預接種物(即步驟120)；

d)根據50至1,200rpm的轉速、優選100至800rpm的轉速和0.5至4體積/體積/分鐘的通風比、優選0.5至3體積/體積/分鐘的通風比加入氧氣，直接將最終預接種物導入第一無菌發酵罐中進行發酵，并在20℃至35℃之間的溫度和在pH4.5至9.0下培育24或48h來獲得發酵期結束的接種物(即步驟130)，其中所述的第一發酵罐含有由維持在100gL^-1的蔗糖或葡萄糖、1.0至37g.L^-1蛋白胨、0.03至0.90g.L^-1K₂HPO₄以及0.001至2.5g.L^-1MgSO₄和/或復合維生素B組成的液體培養基；

e)根據50至1,200rpm的轉速、優選100至800rpm的轉速和0.5至4體積/體積/分鐘的通風比、優選0.5至3體積/體積/分鐘的通風比加入氧氣，并在22℃至35℃之間的溫度、優選22℃至32℃之間的溫度和在pH4.5至9.0下，或在不控制pH(任意pH)下，直接將接種物導入第二無菌發酵罐中，并根據生物聚合物的最終期望用途，進行發酵24至120小時、優選48至72小時(即步驟140)，其中所述的無菌發酵罐含有用于通過深層發酵而生產生物聚合物的液體發酵培養基，或者將所述的無菌培養基加入含有接種物的發酵罐；除了纖維素、米糠和/或麥麩之外，和/或除了0.1至7.2g.L^-1之間的氮、磷和鉀常量元素，和除了0.01至1.7g.L^-1的鎂、鐵微量元素之外，和除了復合維生素B和維生素E以及直至250g.L^-1的蔗糖之外，以及除了50至200ppm的硅酮和/或植物油之外，培養基由帶殼稻米的浸泡液或煮飯水或來自蒸米的水組成；

e)發酵結束后，過濾發酵液以分離細胞(即步驟150)；

f)發酵結束之后，通過用121℃的直接蒸汽加熱殺菌或用氯化物進行化學滅活，致使發酵液直接在發酵罐中被滅活細胞(步驟160)；

g)通過將極性有機溶劑加入滅活的發酵液中，來進行沉淀(步驟170)，其中發酵液中加入或不加入選自濃度為0.2至10％質量/體積比的NaCl、KCl和CaCO₃的一價和/或二價鹽；

h)通過蒸餾回收極性溶劑，并再次用于本方法(步驟170a，步驟260a)；

i)通過最初在傳送帶上排干液體來干燥生物聚合物產物，然后將分離的產物轉入表面干燥器或其它類似裝置中，隨后在任何適于碾碎的常規裝置中進行碾磨或壓碎(步驟180a)；以及

i)回收做好的黃原膠類生物聚合物以備使用(步驟190)。