[發(fā)明專利]神經(jīng)胚素變體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200580035922.5
• 申請日: 2005-08-18
• 公開（公告）號: CN101123978A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發(fā)明（設計）人: 安東尼·羅索曼多;勞拉·西爾維安;R·布萊克·佩平斯基
• 申請（專利權）人: 比奧根艾迪克MA公司
• 主分類號: A61K38/00
• 分類號: A61K38/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 封新琴;巫肖南

相關申請的交叉參考

本申請要求2004年8月19日提交的臨時申請60/602,825以及2005年6月24日提交的臨時申請60/694,067的優(yōu)先權。這些優(yōu)先權文本的全部內(nèi)容包含在本文作為參考。

技術領域

本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)化學，分子生物學和神經(jīng)生物學。

背景技術

神經(jīng)胚素也已知為Artemin和Enovin，其為24-kDa同源二聚體分泌型蛋白，促進外周和中央神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元諸如多巴胺能神經(jīng)元的存活(Baudetet?al.，2000，Development，127：4335；Rosenblad?et?al.，2000，Mol.Cell?Neurosci.，15(2)：199；GenBank?AF?120274)。編碼神經(jīng)胚素的基因已經(jīng)被克隆并測序(Roseblad?et?al.，2000，Mol.Cell?Neurosci.，15(2)：199；Baloh?et?al.，Neuron，21：1291)。

神經(jīng)胚素是膠質(zhì)細胞來源的神經(jīng)細胞營養(yǎng)因子(GDNF)配體家族成員。在細胞水平，GDNF成員活化受體酪氨酸激酶RET。RET結(jié)合共同受體GDNF家族受體alpha(GFRalpha)，其為糖基磷脂酰肌醇(GPI)連接型膜蛋白，提供對RET的配體特異性。已知四種GFRalpha(GFRalpha1-4)。神經(jīng)胚素結(jié)合GFRalpha3，與RET一起形成三元信號復合體(Baudet?et?al.2000，Development，127：4335；Baloh?et?al.，1998，Neuron，21：1291)，其主要定位于痛覺感覺神經(jīng)元上(Orozco?et?al.，2001，Eur.J.Neurosci.，13(11)：2177)。這些神經(jīng)元檢測痛覺和損傷。因此，神經(jīng)胚素在臨床上可用于神經(jīng)病的一般治療并更具體地用于治療神經(jīng)病性疼痛。

神經(jīng)胚素和其它GDNF家族成員是轉(zhuǎn)化型生長因子beta(TGF?beta)超家族成員，并由此其特征在于存在7個具有相似間隔的保守的半胱氨酸殘基，其形成半胱氨酸結(jié)的結(jié)構(gòu)(Saarma，1999，Microsc.Res.Tech.，45：292)。每個單體含有這樣的兩個二硫鍵，其形成封閉的環(huán)結(jié)構(gòu)，包繞第三個二硫鍵以形成緊實的結(jié)狀結(jié)構(gòu)。每個單體中所含的第七個半胱氨酸形成分子間二硫鍵，其共價連接所述單體形成最終的二聚體產(chǎn)物(Rattenholl?et?al?2000，J.Mol.Biol.，305：523)。

TGF?beta家族成員作為前原蛋白合成，所述蛋白在切割信號肽和原結(jié)構(gòu)域以后最終作為成熟同源二聚體分泌(見例如Rattenholl，et?al.，2000，J.Mol.Biol.，305：523；Fairlie?et?al.，2001，J.Biol.Chem.，276(20)：16911)。信號肽和原結(jié)構(gòu)域介導TGF?beta家族成員的正確分泌(Rattenholl?et?al.，2000，J.Mol.Biol.，305：523；Rattenholl?et?al.，2001，Eur.J.Biochem.，268：3296)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明至少部分基于以下發(fā)現(xiàn)：神經(jīng)胚素結(jié)合硫酸肝素以及神經(jīng)胚素多肽中的特定氨基酸殘基對該結(jié)合事件有貢獻。發(fā)現(xiàn)所選氨基酸殘基的取代減少變體神經(jīng)胚素多肽與肝素的結(jié)合并增加該變體的生物活性和生物利用度。

一方面，本發(fā)明的特征在于這樣的多肽，其包含與SEQ?ID?NO：1的氨基酸15-113具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列相對于SEQ?ID?NO：1包含至少一處氨基酸取代，所述氨基酸選自下組：氨基酸，其不同于位于SEQ?ID?NO：1的位置48的相應位置的精氨酸(例如，精氨酸被非保守氨基酸殘基諸如谷氨酸取代)；氨基酸，其不同于位于SEQ?IDNO：1的位置49的相應位置的精氨酸(例如，精氨酸被非保守氨基酸殘基諸如谷氨酸取代)；和氨基酸，其不同于位于SEQ?ID?NO：1的位置51的相應位置的精氨酸(例如，精氨酸被非保守氨基酸殘基諸如谷氨酸取代)。所述多肽在二聚化時結(jié)合含有GFRalpha3和RET的復合體。

一些實施方案中，所述氨基酸序列含有這樣的氨基酸，其不同于位于與SEQ?ID?NO：1的位置48和49相對應位置的精氨酸。例如，SEQ?ID?NO：1的位置48的精氨酸和位置49的精氨酸可被非保守氨基酸(例如谷氨酸)取代。