[發(fā)明專利]阿米巴病亞單位疫苗

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200580027998.3
• 申請(qǐng)日: 2005-06-16
• 公開（公告）號(hào): CN101052412A
• 公開（公告）日: 2007-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·I·拉夫丁;M·D·阿布德阿拉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 明尼蘇達(dá)大學(xué)評(píng)議會(huì)
• 主分類號(hào): A61K39/002
• 分類號(hào): A61K39/002;C07K16/20;C07K14/44
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉冬;梁謀

優(yōu)先權(quán)要求

本專利申請(qǐng)要求對(duì)美國(guó)專利申請(qǐng)No.60/581,248(申請(qǐng)于2004年6月18日)和美國(guó)專利申請(qǐng)No.60/581,577(申請(qǐng)于2004年6月21日)的優(yōu)先權(quán)。這些申請(qǐng)通過引用結(jié)合到本文。

關(guān)于聯(lián)邦贊助研發(fā)的說明

本發(fā)明得到了美國(guó)敏感癥及傳染病研究中心(NIAID)的NIH基金P零,gif1-AB6359-01和U零,gif1-AI35840項(xiàng)目的資助。政府對(duì)本發(fā)明也可擁有yi,gif定權(quán)利。

發(fā)明背景

阿米巴病是由腸道原生動(dòng)物溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoebahistolytica)所引起的疾病或感染。溶組織內(nèi)阿米巴(E.histolytica)是原生動(dòng)物裸根足蟲(naked?rhizopod)的yi,gif個(gè)大屬的成員。溶組織內(nèi)阿米巴是yi,gif種人體寄生阿米巴，它可在感染過程中引起身體組織發(fā)生衰弱。溶組織內(nèi)阿米巴分布極廣，世界范圍內(nèi)如印度、非洲、亞洲、墨西哥和南美的地方病區(qū)域中，每年的人群感染率可高達(dá)20％。在這些感染者中只有約10％最終表現(xiàn)出大腸炎或肝膿腫等癥狀。這種癥狀低發(fā)生率據(jù)信是由宿主的免疫監(jiān)視和寄生蟲品系的變異以及個(gè)體因素(如食物或菌群)之間的平衡所引起的。腸內(nèi)阿米巴感染的“致病型”指溶組織內(nèi)阿米巴，它可以侵入體內(nèi)，并導(dǎo)致感染對(duì)象表現(xiàn)癥狀，同時(shí)引起系統(tǒng)性免疫反應(yīng)。腸內(nèi)阿米巴感染的“非致病型”指不等內(nèi)阿米巴(Entamoeba?dispar)。不等內(nèi)阿米巴與溶組織內(nèi)阿米巴形態(tài)相同，但二者分屬不同的種。不等內(nèi)阿米巴被感染者攜帶，但沒有致病性。最終表現(xiàn)出癥狀的感染者攜帶溶組織內(nèi)阿米巴，鑒別這種感染者首先根據(jù)其獨(dú)特的己糖激酶和葡萄糖磷酸變位酶同工酶，隨后根據(jù)ELISA中的抗原特異性或者PCR結(jié)果的遺傳差異。已知溶組織內(nèi)阿米巴的感染至少部分的由黏著凝集素“Gal/GalNAc”所介導(dǎo)。純化的非還原凝集素在SDS-PAGE中分子量表現(xiàn)為260kDa；經(jīng)β-巰基乙醇還原后得到兩個(gè)亞單位，分子量分別為170kDa(重亞單位)和35kDa(輕亞單位)。抗170kDa亞單位的抗體能夠阻礙對(duì)試驗(yàn)細(xì)胞的表面附著(Petri，1989)。因此相信170kDa亞單位在附著介導(dǎo)中起主要作用，它有時(shí)也被稱作170kDa黏附素。編碼重亞單位和輕亞單位的DNA分子都已被克隆。重亞單位和輕亞單位的編碼mRNA截然不同(Mann，1991)，并且它們的氨基酸組成和N-末端序列也不同。

發(fā)明概述

本發(fā)明提供了基于溶組織內(nèi)阿米巴凝集素的LC3亞單位肽疫苗，其中靈長(zhǎng)類動(dòng)物(如人類)體內(nèi)有效劑量的LC3亞單位肽可引起粘膜上抗凝集素IgA的生成，以抵抗溶組織內(nèi)阿米巴或不等內(nèi)阿米巴。某些實(shí)施方案中，用在疫苗中的LC3亞單位肽包括重組溶組織內(nèi)阿米巴LC3蛋白的表位3或表位7部分，它是凝集素重亞單位(氨基酸758-1134，氨基酸編號(hào)方法與Tannich所述一致(Tannich，1991))的富含半胱氨酸的蛋白。例如，溶組織內(nèi)阿米巴LC3亞單位肽疫苗由LC3的891-903或918-936位氨基酸構(gòu)成(encode)，這是表位3部分(亞單位)，或者由1114-1128位氨基酸構(gòu)成，這是表位7部分(亞單位)。疫苗可與生理學(xué)上可接受的無毒載體和佐劑聯(lián)合使用。

某些實(shí)施方案中，使用純化的LC3亞單位肽編碼DNA表達(dá)LC3亞單位肽。某些實(shí)施方案中DNA編碼的LC3亞單位肽包含從約891到約903位殘基的連續(xù)氨基酸序列，從約918到約936位殘基的連續(xù)氨基酸序列，從約1114到約1128位殘基的連續(xù)氨基酸序列，或者從約1128到約1150位殘基的連續(xù)氨基酸序列。某些實(shí)施方案中所用的LC3亞單位肽是野生型LC3亞單位肽的變異體，其不同之處在于該野生型LC3亞單位肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基進(jìn)行了修飾。這種修飾可以是例如一個(gè)或多個(gè)殘基的替換(如保守性替換)。疫苗可進(jìn)一步包含有效劑量的免疫佐劑或者其它免疫激發(fā)劑。某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)亞單位肽與載體分子綴合或連接。例如將1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)或6個(gè)肽連接到載體分子上。這些肽可以都屬于同一類型，也可以為不同種類。例如，3個(gè)包含918-936位殘基的亞單位肽和3個(gè)包含1128-1150位殘基的亞單位肽可以同時(shí)連接到一個(gè)多賴氨酸骨架上。又例如將所有四種可用肽中的至少一種連接到載體分子上。例如，載體分子可以是多肽或者多糖。