[發(fā)明專利]檢測多態(tài)性蛋白質(zhì)的表型的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200580023367.4
• 申請日: 2005-07-11
• 公開（公告）號: CN101142320A
• 公開（公告）日: 2008-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 安德魯·利維;尼娜·利維
• 申請（專利權(quán)）人: 拉帕波特家族醫(yī)學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/00;C12P21/08;C07K16/34
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供了與多態(tài)性蛋白質(zhì)(polymorphic?protein)的等位基因變體區(qū)別性反應的抗體、鑒定所述等位基因變體的方法、其中包含的抗原結(jié)合片段、其編碼核酸、包含其的蛋白質(zhì)、細胞、病毒顆粒、組合物以及試劑盒。本發(fā)明還提供了用于確定個體的觸珠蛋白類型的方法以及測試個體對糖尿病并發(fā)癥的易感性的方法。

背景技術(shù)

位于16q22的觸珠蛋白基因座具有多態(tài)性，其具有兩類已知的等位基因，稱為1和2[Langlois?M?et?al，Clin?Chem?42：1589-1600，1996]。這種多態(tài)性相當普遍，且這兩種等位基因的頻率在全世界范圍內(nèi)大致相同。多個縱向和橫向的人群研究顯示，觸珠蛋白是發(fā)生糖尿病血管并發(fā)癥的重要易感性基因[Levy?A?et?al，New?Eng?J?Med?343：969-70，2000；RoguinA?et?al，Am?J?Card?87：330-2，2001]。與觸珠蛋白1等位基因(Hp1)純合子型的糖尿病者相比，觸珠蛋白2等位基因(Hp2)純合子型的糖尿病者發(fā)生心血管疾病的危險性要高5倍，而雜合子型的危險性介于中間[LevyA?et?al，J?Am?Coll?Card?40：1984-90，2002]。使用Hp1和Hp2等位基因的純化蛋白產(chǎn)物進行機制研究發(fā)現(xiàn)它們在抗氧化和免疫調(diào)節(jié)活性方面具有深刻的不同[Frank?M?et?al，Blood；98：3693-8，2001；Asleh?R?et?al，Circ?Res92：1193-200，2003]。

各種觸珠蛋白等位基因蛋白產(chǎn)物之間存在功能和結(jié)構(gòu)上的不同[Langlois?M?et?al，Clin?Chem?42：1589-1600，1996]。Hp2等位基因具有兩個拷貝的Hp1等位基因的外顯子3和4，這導致外顯子3的多聚化結(jié)構(gòu)域發(fā)生重復。其結(jié)果是，盡管Hp1等位基因蛋白產(chǎn)物僅形成二聚體，但Hp2等位基因蛋白產(chǎn)物結(jié)合形成大小為3個單體及以上的環(huán)形多聚體。在雜合子中存在含有兩種等位基因蛋白產(chǎn)物的線性多聚體。

開發(fā)用于對觸珠蛋白進行分型的基于抗體的ELISA測定的困難在于所述等位基因蛋白產(chǎn)物的任何一方均顯然缺乏特有的抗原決定簇。除了外顯子3的重復部位的單一連接以外，觸珠蛋白等位基因之間在一級氨基酸序列上沒有差別。鑒于需要對大量糖尿病個體(在西方國家占人群的10％)就其觸珠蛋白類型進行篩選以確定最佳的治療，以及需要快速篩選特定人群(即患有急性心肌梗死的個體)，因此非常需要一種用于對觸珠蛋白進行分型的簡單、快速而廉價的測試方法。

發(fā)明內(nèi)容

在一個實施方式中，本發(fā)明提供抗觸珠蛋白(Hp)抗體，其與Hp2-2結(jié)合的親和力高于與Hp2-1結(jié)合的親和力，且與Hp2-1結(jié)合的親和力高于與Hp1-1結(jié)合的親和力。在一個實施方式中，抗體可具有如SEQ?ID?No1所示的氨基酸序列。

在另一個實施方式中，本發(fā)明提供抗觸珠蛋白(Hp)抗體的抗原結(jié)合片段，其與第一種觸珠蛋白同種型結(jié)合的親和力高于與第二種觸珠蛋白同種型結(jié)合的親和力。在另一個實施方式中，本發(fā)明提供抗體或重組蛋白質(zhì)，其包括上述抗原結(jié)合片段。在一個實施方式中，所述抗體是單克隆抗體。在另一個實施方式中，所述抗體是多克隆抗體。在另一個實施方式中，所述抗體是人源化抗體或嵌合型抗體。在另一個實施方式中，所述抗體是scFv抗體。

在另一個實施方式中，本發(fā)明提供分離的核酸，其編碼本發(fā)明的任何抗觸珠蛋白(Hp)抗體。在另一個實施方式中，本發(fā)明提供分離的核酸，其編碼本發(fā)明的任何抗原結(jié)合片段。

在另一個實施方式中，本發(fā)明提供一種確定個體的觸珠蛋白類型的方法，所述方法包括(a)將所述個體的生物學樣品與抗觸珠蛋白抗體相接觸；和(b)在一定條件下定量確定所述觸珠蛋白的蛋白質(zhì)與所述抗體之間的結(jié)合或相互作用，其中在所述條件下自所述定量確定獲得的值特征性表示所述生物學樣品中存在Hp1-1、Hp2-1或Hp2-2。

在另一個實施方式中，本發(fā)明的任何方法可用于測試個體對糖尿病并發(fā)癥的易感性。