[發明專利]通過提高的分泌來生產多肽的方法

有效

• 申請號: 200580019938.7
• 申請日: 2005-06-16
• 公開（公告）號: CN101146820A
• 公開（公告）日: 2008-03-19
• 發明（設計）人: 科尼利斯·瑪麗亞·雅各布斯·沙吉;諾林·尼古拉斯·瑪麗亞·艾里薩伯斯·佩伊·范;琳達·蘭格·德;馬帝那·貝舒森;瑟戈·彼得呂斯·當克斯
• 申請（專利權）人: 帝斯曼知識產權資產管理有限公司
• 主分類號: C07K14/14
• 分類號: C07K14/14
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 肖善強

1.一種SEC61多肽，其選自下述多肽構成的組：

(a)具有根據SEQ?ID?NO：3的氨基酸序列的多肽，和

(b)具有與根據SEQ?ID?NO：3的氨基酸序列至少89％，優選至少90％，進一步更優選至少92％，進一步更優選至少93％，進一步更優選至少94％，進一步更優選至少95％，進一步更優選至少96％，進一步更優選至少97％，進一步更優選至少98％以及最優選至少99％的相同程度的氨基酸序列的多肽。

2.如權利要求1所述的多肽，其具有根據SEQ?ID?NO：9的氨基酸序列。

3.與根據SEQ?ID?NO：3的氨基酸序列具有至少85％相同程度的多肽，其中，對應于SEQ?ID?NO：3第373至379位的保守基元中的至少一個氨基酸被修飾。

4.如權利要求2所述的多肽，其中，被修飾的至少一個氨基酸處于對應于SEQ?ID?NO：3第376位的位置上。

5.如權利要求3所述的多肽，其中，對應于SEQ?ID?NO：3第376位的位置上的氨基酸被色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或組氨酸置換，優選被色氨酸置換。

6.如權利要求2-4所述的多肽，其中，被修飾的至少一個氨基酸是絲氨酸。

7.如權利要求1或3-6中任意一項所述的多肽，其具有根據SEQ?IDNO：6的氨基酸序列。

8.經過分離的多核苷酸，其包含下述核酸序列，所述核酸序列編碼根據前述權利要求中任意一項所述的多肽。

9.如權利要求8所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸或核酸序列選自由下述物質構成的組：

(a)根據SEQ?ID?NO：1的多核苷酸，

(b)根據SEQ?ID?NO：2的核酸序列，

(c)與SEQ?ID?NO：2的核酸序列具有至少90％相同程度的核酸序列，以及

(d)編碼下述多肽的核酸，所述多肽具有與SEQ?ID?NO：3的氨基酸序列實質上同源的氨基酸序列。

10.核酸構建體或表達載體，其包含權利要求8或9的編碼SEC61多肽的核酸序列，所述核酸序列與一種或多種控制序列可操作地相連，所述控制序列指導所述多肽在合適的宿主中的表達。

11.如權利要求10所述的核酸構建體或表達載體，其中所述控制序列包含啟動子、轉錄和翻譯終止信號。

12.用權利要求8-11所述的多核苷酸、核酸構建體或表達載體轉化的宿主細胞。

13.如權利要求12所述的宿主細胞，其中內源sec61基因被失活。

14.如權利要求12或13所述的宿主細胞，其是有絲真菌細胞。

15.如權利要求14所述的宿主細胞，其中，所述有絲真菌細胞屬于選自由Aspergillus、Penicillium或Trichoderma的種構成的組的種。

16.如權利要求15所述的宿主細胞，其中，所述有絲真菌細胞屬于Aspergillus?niger或Aspergillus?oryzae的種。

17.如權利要求12至16中任意一項所述的宿主細胞，其中，所述宿主細胞額外包含編碼目標多肽的多核苷酸，或包含編碼目標多肽的核酸序列的表達載體。

18.一種方法，用于生產目標多肽，所述方法包括：在有益所述目標多肽表達的條件下，培養權利要求16所述的宿主細胞，以及可選地，從培養液中回收所述目標多肽。