[發(fā)明專利]DNA病毒微小RNA及其抑制方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200580018253.0
• 申請日: 2005-04-04
• 公開（公告）號: CN101426535A
• 公開（公告）日: 2009-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 托馬斯·H·圖斯赫爾;塞巴斯蒂安·普費(fèi)弗
• 申請（專利權(quán)）人: 洛克菲勒大學(xué)
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;C07H21/04;C12N15/86
• 代理公司: 北京康信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 章社杲

本申請中描述的發(fā)明是在來自國立衛(wèi)生研究院的資助下(資助 號R01-GM068476-01)完成的。美國政府對本發(fā)明擁有一定權(quán)利。

本申請是2004年10月19日提交的序列號10/968,821的美國 專利申請的部分延續(xù)，其是2004年8月24日提交的序列號 10/925,363美國專利申請的部分延續(xù)，后者又是2004年4月5日提 交的序列號10/819,098的美國專利申請的部分延續(xù)。因此，序列 號10/925,363、10/819,098和10/968,821的美國專利申請的說明書 的全部內(nèi)容合并于此供參考。

背景技術(shù)

微小RNA(microRNA)是約22個(gè)核苷酸的小RNA分子。這 些微小RNA分子可以在多種生物體中以序列特異性方式控制基因 表達(dá)。

在許多生物體中，由雙鏈RNA(dsRNA)(例如siRNA和微小 RNA)介導(dǎo)的RNA沉默，是抗RNA病毒和轉(zhuǎn)座因子的先天免疫反 應(yīng)的一部分。在諸如植物病毒和昆蟲獸棚病毒(insect?Flock?House? virus)中存在阻礙宿主反應(yīng)的反防御措施。這些病毒表達(dá)抑制劑如 dsRNA結(jié)合蛋白，可以干擾宿主細(xì)胞RNA沉默系統(tǒng)。

例如，有報(bào)道稱微小RNA部分與靶基因的mRNA的非編碼3’ 區(qū)雜交后，能夠阻斷翻譯。微小RNA靶向的基因大部分尚待表征 化。然而，越來越多的證據(jù)表明多種疾患和病痛中涉及微小RNA。 例如，已表明果蠅微小RNA靶向涉及凋亡的基因，而B細(xì)胞慢性 淋巴細(xì)胞性白血病與兩種微小RNA的缺失有關(guān)。

然而迄今為止，尚未報(bào)道存在由哺乳動(dòng)物病毒編碼的微小 RNA。鑒定哺乳動(dòng)物病毒微小RNA以及(如果存在)了解它們的 生物學(xué)功能將會(huì)促進(jìn)新型抗病毒藥物的開發(fā)。

因此，有必要鑒定病毒微小RNA，并需要開發(fā)有助于說明已 知的和未來的病毒微小RNA的功能的新材料和方法。

由于微小RNA能夠誘導(dǎo)RNA降解或者阻遏編碼重要蛋白的 mRNA翻譯，因此也有必要開發(fā)新型分子，其抑制DNA病毒微小 RNA誘導(dǎo)的靶mRNA的斷裂或者翻譯阻遏。

發(fā)明內(nèi)容

在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及包含DNA病毒微小RNA序列 的獨(dú)立的(isolated)核酸分子。

在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及獨(dú)立的單鏈DNA病毒微小 RNA分子。該分子含有最少10個(gè)、最多50個(gè)在分子主鏈上的部分， 該分子主鏈含有主鏈單位。每個(gè)部分包括鍵合到主鏈單位的堿基， 其中至少10個(gè)相鄰堿基具有與DNA病毒微小RNA分子內(nèi)堿基序 列相同的序列，只是達(dá)到30％的堿基對可能是擺動(dòng)堿基對，并且達(dá) 到10％的相鄰堿基是添加、缺失、錯(cuò)配或其組合；并且不多于50％ 的相鄰部分含有脫氧核糖核苷酸主鏈單位。

在又一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及獨(dú)立的單鏈抗DNA病毒微小 RNA分子。該抗DNA病毒微小RNA分子含有最少10個(gè)、最多50 個(gè)在分子主鏈上的部分，該分子主鏈包括骨架單位。每個(gè)部分包括 鍵合到主鏈單位的堿基，每個(gè)堿基與互補(bǔ)堿基形成Watson-Crick堿 基對，其中至少10個(gè)相鄰堿基具有與DNA病毒微小RNA分子內(nèi) 相鄰堿基序列互補(bǔ)的序列，只是達(dá)到30％的堿基對可能是擺動(dòng)堿基 對，并且達(dá)到10％的相鄰堿基是添加成、缺失、錯(cuò)配或其組合；不 多于50％的相鄰部分含有脫氧核糖核苷酸主鏈單位；并且該分子能 夠抑制微小RNP(micro?RNP)活性。

在又一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及用于抑制細(xì)胞中微小RNP活 性的方法。該微小RNP包括DNA病毒微小RNA分子，該DNA病 毒微小RNA分子包含與單鏈抗DNA病毒微小RNA分子內(nèi)堿基序 列互補(bǔ)的堿基序列。該方法包括將單鏈抗DNA病毒微小RNA分子 導(dǎo)入細(xì)胞，該分子含有在分子主鏈上的最少10個(gè)部分、最多50個(gè) 部分的序列，該分子主鏈含有主鏈單位，每個(gè)部分含有鍵合到主鏈 單位的堿基，每個(gè)堿基與互補(bǔ)堿基形成Watson-Crick堿基對，其中 抗DNA病毒微小RNA分子的至少10個(gè)相鄰堿基與DNA病毒微 小RNA分子互補(bǔ)，只是達(dá)到30％的堿基可能被擺動(dòng)堿基對取代， 并且至少10部分中達(dá)到10％是添加、缺失、錯(cuò)配或其組合；不多 于50％的相鄰部分含有脫氧核糖核苷酸主鏈單位。