[其他]一種用牛、馬血清制備放免及生化質控物的方法

在審

• 申請號: 101987000000515
• 申請日: 1987-01-26
• 公開（公告）號: CN1005220B
• 公開（公告）日: 1989-09-20
• 發明（設計）人: 鄧尚平;李幼平;趙桂芝
• 申請（專利權）人: 華西醫科大學
• 代理公司: 華西醫科大學專利事務所
• 代理人: 舒先華

本發明為一種采用牛、馬血清制備放射免疫和生化測定質控物的方法。本方法以牛血清或馬血清為原料，用親和層析法或離子交換層析法，特異性除去血清中所含的某種待測物或／和干擾測定的激素、生物活性物質、酶、電解質后，作為配制該待測物的生化或放免測定質控物的基質，在其中加入一定量的已知待測物，從而配制成為用放免或生化方法檢測該待測物的質量控制品。本發明的優點是：原料來源豐富，成本低廉。使用安全。制備方法先進，產品質量穩定可靠。

本發明屬于生物制品（診斷試劑）的制備方法。所得產品可以作為放射免疫（RIA）和生物化學檢測的質控物，是用于監控放免和生化測定準確性所必備的試劑。

目前世界上普遍采用的質控物制備方法，是選擇乙肝病毒表面抗原陰性（HBsAg（一））的正常人或病人血清，經簡單處理后，進行調配制得。

例如：

中華人民共和國衛生部藥品和生物制品檢定所（1981）曾用正常人混合血清加10%糖用活性碳攪拌6～8小時，4℃吸附24小時，4000rpm低溫離心，取上清液經2kg/cm²氮氣加壓過濾除菌，得到低T₃、T₄純品，分裝，凍干，制成T₃、T₄放免質控物。

上海市計劃生育研究所（1983）制備生殖激素放免質控物，是收集含某種激素較高或較低的人血清，互相調配制成。

近年出現在“剔除”某物質的血清中，加入被測標準物的方法。如英國愛丁堡實驗室（1982）采用在人血清中加入少量標記LH和FSH，與過量偶聯有豚抗LH和豚抗FSHIgG的瓊脂凝膠處理，混合后，過夜。濾取血清，加入過量偶聯有羊抗豚IgG瓊脂凝膠處理，以去除血清中含有的少量豚抗LH和FSHIgG。此法仍不能完全除去LH和FSH，其血清中含標記的LH和FSH仍有原量的10%。

生物化學檢驗質控物，近年有報導用動物血清取代人血清作原料者，但是均未采用親和層析法和離子交換層析法處理血清。

上述方法由于大多采用人血清作原料，大量采集不易，血清均質性差，乙型肝炎表面抗原陽性率高，大批量生產和長期保存困難，成本較高。而且，上述處理方法也不可能特異去除某種待測物或干擾物，因而得不到真正不含某種待測組分的“零”血清，故質控物的質量不高、穩定性差;且處理方法的工藝繁復，所用材料多只能一次性使用。

本發明的目的是：在提高質量，降低成本，保證使用安全的前題下，尋求一種質控物基質材料生產的新材料、新方法。

本發明的要點是：以馬血清或牛血清為原料，過濾除菌后，經各種特定的親和層析或離子交換層析處理，制成不含某種待測物或干擾物的“零”血清，再加入一定量的某種激素、生物活性物質、酶或電解質純品，配制成包括零、低、中、高濃度該物質的放射免疫或生化質控物。

本發明的優點是：原料來源豐富，成本低，使用安全。制備方法先進，產品質量穩定可靠。

圖1是放免及生化質控物生產流程圖;圖2是去激素或生物活性物質的親和層析柱制備工藝流程;圖3是去酶親和層析柱的制備。

實施例：

一、制取去激素和去生物活性物質血清的工藝流程如下（以去生長激素（hGH）血清的制備為例，參見工藝流程圖Ⅰ、Ⅱ）。

1.抗hGHIgG的提純：將抗hGH血清10ml用等體積Tris/HCl（0.2M.pH8.6含2M/LNaCl緩沖液稀釋，加于supA-瓊脂糖凝膠（supA-Sepharose4B）層析柱（1×10cm）分離純化。用0.1M的相同緩沖液淋洗至無蛋白流出后，用0.05MHAc/HCl（pH3.0）緩沖液洗脫，收集洗脫液的蛋白峰，立即加入等體積的0.1MH₃PO₄（pH9.0）中和至pH8.6，此即為有活性的特異性IgG（回收率可達80%）。

2.抗hGHIgG-瓊脂糖凝膠親和層析柱的制備：