[其他]橡膠聚合酶的生產(chǎn)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 101986000002341
• 申請(qǐng)日: 1986-04-08
• 公開（公告）號(hào): CN1004145B
• 公開（公告）日: 1989-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 約瑟夫·呂漢超;戴維·斯科特·施里夫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 固特異輪胎和橡膠公司
• 代理公司: 中國(guó)專利代理有限公司
• 代理人: 劉元金

1、一種生產(chǎn)基本上純化形式的橡膠聚合酶的方法，包括下述各步驟：

（1）先從含有橡膠聚合酶的三葉膠屬的一種植物中制備化學(xué)穩(wěn)定的膠乳，這種酶可與上述膠乳中的橡膠粒子結(jié)合在一起，也可以游離于溶液中，制備方法是將大約1至10體積的由多羥基化合物、防微生物試劑和緩沖劑組成的穩(wěn)定溶液，加入到大約一個(gè)體積的上述膠乳中;

（2）用層析分離法在0-4℃分離上述膠乳溶液中的游離的橡膠聚合酶;

（3）將分離出的橡膠聚合酶提純，以制備基本上純化形式的橡膠聚合酶。

2、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的植物是巴西三葉膠。

3、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述穩(wěn)定溶液可以含有巰基化合物。

4、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述多羥基化合物可以是甘油，山梨糖醇、蔗糖等。

5、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述穩(wěn)定溶液是由大約10%至80%（重量/體積）的甘油，大約0.001%至1%（重量/體積）的疊氮化鈉，和緩沖劑組成的;溶液pH值大約從7至12。

6、根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所述穩(wěn)定溶液是由50%（重量/體積）的甘油，大約0.3%（重量/體積）的疊氮化鈉和大約0.1M的碳酸氫鈉組成的。

7、根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述穩(wěn)定溶液，還含有大約5mM的半胱氨酸。

8、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述層析分離法是指離子交換層析法。

9、根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述離子交換層析法是指包括用離子交換樹脂與上述膠乳混合的層析分離方法，上述在溶液中游離的橡膠聚合酶與樹脂結(jié)合，產(chǎn)生聚合酶-樹脂復(fù)合物，分離復(fù)合物，然后從復(fù)合物中分離出橡膠聚合酶。

10、根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述離子交換樹脂是指陰離子交換樹脂。

11、根據(jù)權(quán)利要求1，其中所述提純，包括下述各步驟：

將分離后的橡膠聚合酶進(jìn)行透析制成一種透析液;

加一種凝膠劑到上述透析液中，使生成凝膠聚合酶復(fù)合物;

將上述復(fù)合物從上述透析液中分離出來;

將上述聚合酶從上述復(fù)合物中分離出來;

將取出的聚合酶進(jìn)行凝膠過濾層析分離，以制備基本上純化形式的橡膠聚合酶。

12、根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述的提純還包括另一操作步驟：將上述滲析液與一種吸附蛋白質(zhì)的吸附劑混合，然后在加入上述凝膠前，從透析液中分離出吸附劑。

13、根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述吸附劑是指γ-氧化鋁。

14、根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述凝膠劑是指磷酸鈣凝膠。

15、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述提純，包括下述各步驟：

將上述溶液中游離的橡膠聚合酶與抗橡膠聚合酶的各種固相抗體接觸，以便生成橡膠聚合酶抗體復(fù)合物;

從上述溶液中將復(fù)合物分離;

從上述復(fù)合物中分離出橡膠聚合酶。

16、生產(chǎn)基本上純化形式的橡膠聚合酶的方法，包括下述各步驟：