[其他]尿嘧啶核苷的制備

在審

• 申請號: 101985000007905
• 申請日: 1985-10-26
• 公開（公告）號: CN85107905B
• 公開（公告）日: 1988-06-29
• 發明（設計）人: 常見裕;朝日知;土井宗晴
• 申請（專利權）人: 武田藥品工業株式會社
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 李雒英;巫肖南

在一種培養基里培養產生尿嘧啶核苷的微生物和回收累積尿嘧啶核苷的方法以生產尿嘧啶核苷。微生物為桿菌屬，缺乏尿嘧啶核苷核苷磷酸化酶活性并對嘧啶類似物有抗性。這種方法優點是避免尿嘧啶和尿嘧啶核苷酸副產物的生成。

本發明涉及一種生產尿嘧啶核苷的發酵法，尿嘧啶核苷作為一種生化試劑（參閱Methods in Enzymology，Vol.VI.Academic Press，New York and London，1963，P.194）或合成藥物的起始原料（參閱Collection Czechosiov.Chem.Commun VOl.39，3100-3108，1974;Bulletin of the Chemical Society of Japan，Vol 48（7），2084-2090，1975;Chem，Pharm，Bull.，Vol.19，2466-2471，1971）是很有用的。

到目前為止，從所周知發酵法生產尿嘧啶核苷是使用一從小單孢子屬（genus Micromonos）菌株衍生出來的嘧啶類似物抗株〔Japanese Patent Publication（laid open）No.139786/1977（Tokukaisho 52-139786）〕和從短菌屬（genus Brevibacterium）菌株衍生出來的嘌呤類似物抗株〔Japanese Patent Publication（laid open）No.38691/1983（Tokukaisho 53-38691）〕。在上述方法里，在培養基中同時累積尿嘧啶和尿嘧啶核苷酸。

本發明提供一種用桿菌屬（genus Bacillus）的微生物生產尿嘧啶核苷的方法。這種方法產率高，有利于工業化生產，而不同于前面指出的使用小單孢子屬和短菌屬微生物的方法。

本發明者對用桿菌屬菌株生產尿嘧啶核苷的發酵法進行了深入細致的研究，結果發現了一種屬于桿菌屬的微生物，它缺乏尿嘧啶核苷核苷磷酸化酶活性并且對嘧啶類似物具有抗性。這種微生物在培養基中能產生和累積足量的尿嘧啶核苷。基于對此發現的不斷研究，完成了這個發明。

因此，本發明提供了一種生產尿嘧啶核苷的方法，此法包括在一種培養基里培養一種產生尿嘧啶核苷的微生物，它屬于桿菌屬，缺乏尿嘧啶核苷核苷磷酸化酶活性并且對嘧啶類似物具有抗性，因此引起尿嘧啶核苷在該培養液中的形成和累積，并回收累積的尿嘧啶核苷。

所謂的“缺乏尿嘧啶核苷核苷磷酸化酶活性”微生物意指該微生物具有的尿嘧啶核苷核苷磷酸化酶活性值不大于0.01單位（毫微摩爾/最小量）/mg蛋白質，此系據J.J.Scocca法測定的。（“Methods in Enzymology”，Vol.LI，edited by P.A.Hoffee and M.E.Jones，Academic Press，New York，1978，P.432，此文公開的內容通過參考引用于本文。“對嘧啶類似物具有抗性”的微生物意指用桿菌屬的菌株作為親本菌株而衍生出來的微生物，在遺傳特性方面被改變使得它能在含有高濃度嘧啶類似物的培養基中生長，即可以在不低于親本菌株不能生成的培養基濃度的兩倍，最好是不低于三倍的濃度中生長。“嘧啶類似物”意指一個結構如尿嘧啶和胞嘧啶這樣的嘧啶堿類似物質，如6-氮尿嘧啶，2-硫尿嘧啶，5-羥基尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，以及它們的核糖核苷或核糖苷酸。抗嘧啶類似物的微生物充分條件是至少對一種嘧啶類似物具有抗性。