[發明專利]一種乳制品中葉酸含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201210566051.1
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103063768A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 石丹;劉彪
• 申請（專利權）人: 內蒙古伊利實業集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾

1.一種乳制品中葉酸含量的檢測方法，該方法包括如下步驟：

(1)樣品前處理：取乳制品樣品，配制成水溶液，超聲波振蕩萃取，加入高氯酸沉淀蛋白質，離心，過濾，濾液備用；

(2)固相萃取凈化：利用固相萃取柱對步驟(1)得到的濾液進行凈化，以除去其中的干擾物質，收集過柱后的樣品，氮氣吹干，備用；

(3)衍生：將步驟(2)得到的樣品用水溶解，加入過氧化氫水溶液、氫氧化鈉水溶液和水，混勻后加熱處理，然后水洗冷卻得到衍生樣品；

(4)色譜檢測：使用C18色譜柱對步驟(3)得到的衍生樣品進行檢測。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述乳制品為液態乳制品或乳粉，步驟(1)中是取乳制品樣品調配成固形物含量0.1～0.2g/ml的水溶液。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，步驟(1)中配制的乳制品樣品溶液先在30～50℃下超聲波萃取10～20min，再加入50％～60％濃度的高氯酸沉淀蛋白質，沉淀完全后4000r/min離心15min，過濾，濾液備用。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述固相萃取柱為C18固相萃取小柱。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，所述固相萃取凈化步驟中，先用甲醇活化萃取柱，取5mL～10mL樣品清液加到柱床上，用固相萃取儀控制流速在40d/min，使樣品流過填料；待樣液全部通過固相萃取柱后，用5～10mL去離子水將干擾物洗出；再用5～10mL?甲醇洗脫，收集洗脫液，氮氣吹干，保存備用。

6.根據權利要求1或5所述的方法，其中，所述衍生步驟中，用1mL水復溶經氮氣吹干的樣品，向復溶后的樣品中加1～3mL的體積百分比濃度為5％～20％的過氧化氫溶液衍生劑、1～3mL的0.05～2mol/L的氫氧化鈉和1～3mL的去離子水，混勻，然后加熱處理使樣品中的葉酸在堿性條件下與過氧化氫發生衍生反應，冷卻，用有機系針頭式濾膜過濾到自動進樣瓶中，上機備用。

7.根據權利要求6所述的方法，其中，所述加熱處理為在60℃下加熱40～50min；或者為先在30～50℃下加熱30～60min，再升溫至50～70℃加熱30～60min。

8.根據權利要求1所述的方法，其中，所述色譜檢測條件為：色譜柱BDS?HYPERSILC18，柱體積250×4.6mmi.d.5μm；柱溫為30℃；檢測器為熒光檢測器，檢測波長Ex為285nm，Em為437nm；流動相為含乙腈15％的0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液；流速1mL/min；進樣量20μL。