[發(fā)明專利]灰樹花子實體多糖肽的提取分離方法

無效

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• 申請日: 2002-08-28
• 公開（公告）號: CN1398898A
• 公開（公告）日: 2003-02-26
• 發(fā)明（設計）人: 茅仁剛;藍德剛;王強
• 申請（專利權）人: 維京仲華（上海）生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07K14/37
• 分類號: C07K14/37;C08B37/00;A61P35/00;A61P9/12;A61P3/10;A61P3/06
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 孫躍虹

1、灰樹花子實體多糖肽的提取分離方法，其特征在于該方法是將灰樹花子實體粉碎，熱水提取，乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀，得水溶性粗多糖肽，然后進行分級分離；提取水溶性多糖肽后得殘渣加稀酸提取，乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀，得酸溶性粗多糖肽；提取酸溶性多糖肽后的殘渣加稀堿提取，乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀，得堿溶性粗多糖肽。

2、如權利要求1所述的灰樹花子實體多糖肽的提取分離方法，其特征在于其中所述的水溶性多糖肽的分離包括下列步驟：

A、水溶性粗多糖的提取：

以灰樹花子實體為原料，粉碎成細粉，加2-20倍蒸餾水，熱水50-121℃提取1-20小時，離心，上清液備用；殘渣重復提取2-5次合并所有上清液，減壓濃縮，緩慢加入1-4倍體積95％乙醇，攪勻，4℃過夜，離心，沉淀減壓干燥，粉碎過100目，即得灰樹花水溶性粗多糖肽；多糖含量為5％-90％，多肽含量為80％-5％；

B.水溶性多糖肽的分級分離

(1)粗多糖肽溶解于蒸餾水中，加1倍量95％乙醇沉淀，離心分離，沉淀溶于蒸餾水中；

(2)加1-20％CAT-OH至不再產生沉淀或加CAT-Br并用NaOH溶液調節(jié)pH≥8，離心分離，上清液濃縮，脫蛋白，加入2-4倍量95％乙醇沉淀，干燥得FB-1；

(3)取上述(2)分離后沉淀加入1-50％乙酸5-100ml，離心，上清液濃縮，脫蛋白，加入2-4倍量95％乙醇沉淀，干燥得FB-2；

(4)取上述(3)分離后沉淀加入0.5-20％NaOH溶液溶解，離心，取上清液，用乙酸調節(jié)pH5-8，加入1-4倍量95％乙醇，離心分離沉淀，上清液濃縮，脫蛋白，加入2-4倍量95％乙醇沉淀，干燥得FB-3；

5)取上述(4)分離后沉淀溶解于蒸餾水中，脫蛋白，加1-4倍量95％乙醇，離心，沉淀用95％乙醇洗滌，無水乙醇洗滌，減壓干燥，碾碎即得FB-4。

3、如權利要求1所述的灰樹花子實體多糖肽的提取分離方法，其特征在于其中所述的酸溶性多糖肽的提取包括下列步驟：

將權利要求2步驟A中灰樹花子實體熱水提取后留下的殘渣加入3-20倍量1-10％鹽酸、醋酸等酸，室溫至80℃下浸提6-48小時，離心得到酸提液，重復3次，酸提液合并，用堿調節(jié)pH7-10，離心，沉淀用蒸餾水溶解，對自來水流水透析12-48小時，對蒸餾水透析0.5-2天，減壓干燥即得FBAc-1；透析液濃縮，加1∶0.5-4倍體積95％乙醇，4℃過夜，離心得沉淀溶于蒸餾水，透析，減壓干燥得FbAc-2；酸溶性多糖肽中糖含量為5-99％，蛋白質含量為50-0.5％。

4、如權利要求1所述的灰樹花子實體多糖肽的提取分離方法，其特征在于其中所述的堿溶性多糖肽得提取包括下列步驟：

將權利要求3中灰樹花子實體熱水提取后留下得殘渣加入3-20倍量1-30％堿，此堿可以是氫氧化鈉、氫氧化鈣等，室溫至80℃下浸提12-48小時，離心得到堿提液，重復3次，堿提液合并，用乙酸調節(jié)pH4-9，離心，沉淀用蒸餾水溶解，對自來水流水透析12-48小時，對蒸餾水透析0.5-2天，減壓干燥即得FBA1-1；透析液濃縮，加1∶0.5-4倍體積95％乙醇，4℃過夜，離心得沉淀溶于蒸餾水，透析，減壓干燥得FbA1-2；堿溶性多糖肽中糖含量為5-99％，蛋白質含量為50-0.5％。

5、如權利要求1或2所述的灰樹花子實體多糖肽的提取分離方法，其特征在于其中所述的：

FB-1組分為不與CAT-基團結合的多糖肽，其中糖含量為5-80％，蛋白質含量為80-5％；

FB-2、3、4組分為能與CAT-基團結合的多糖肽，結合物不溶于水，其中糖含量為5-80％，蛋白質含量分別為80-5％；

FB-2的主要組分為溶于乙酸的酸溶性多糖肽，其中糖含量為5-80％，蛋白質含量為80-5％；

FB-3的主要組分為溶于氫氧化鈉的堿溶性多糖肽，其中糖含量為5-80％，蛋白質含量為80-5％；

FB-4的主要組分為溶于氫氧化鈉的堿溶性多糖肽其中糖含量為5-80％，蛋白質含量為80-5％；FB-4組分的多糖平均分子量為1×10⁴-1×10⁶，其單糖組成以葡萄糖為主，其中以β-1，3糖苷鍵為主要連接鍵。

6、如權利要求1或2或3或4所述的灰樹花子實體多糖肽的提取分離方法，其特征在于其中所述的分離獲得的多糖肽可用Sevag法、三氯乙酸法、盒酶法或幾種方法同時應用進行脫蛋白處理，以得到純化多糖，多糖含量為10-99.5％。