[發明專利]低密度脂蛋白膽固醇測定方法及試劑

無效

• 申請號: 02118800.9
• 申請日: 2002-05-10
• 公開（公告）號: CN1379234A
• 公開（公告）日: 2002-11-13
• 發明（設計）人: 肖洪武
• 申請（專利權）人: 肖洪武
• 主分類號: G01N21/27
• 分類號: G01N21/27;G01N33/92;G01N33/52
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司
• 代理人: 唐迅

本發明涉及一種低密度脂蛋白膽固醇的測定方法及試劑。

眾多流行病學、遺傳學與臨床研究證明，血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平與動脈粥樣硬化、冠心病(CHD)的發生率成正相關，通常以高含量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)作為冠心病(CHD)的首要致病因素，所以，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定方法的準確性至關重要，現今臨床上常用的方法有Friedewaly公式化、化學沉淀法、電泳法、免疫分離法等，前兩中最常用，但測定中易受高甘油三酯和血清預處理產生的誤差影響。所以，研究一種標本用量少、測定簡便快捷、干擾少、高精確度和高準確度的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定方法和測定試劑適應自動化分析是十分必要的。

近年來，國內外也開發了一些在自動生化分析儀上使用的LDL-C直接測定試劑，其中，一些采用聚陰離子和二價金屬鹽復合物、糖化合物和二價金屬鹽復合物，如中國專利CN-1281981A公開了一種低密度脂蛋白膽固醇測定試劑，它包括由α-磺化環狀糊精、硫酸葡聚糖、MgCl2、二氯苯酚、N-乙基-N-(3-甲苯基)-N＇-琥珀酰乙烯二胺、3-(N-嗎啡啉)-2-羥丙基磺酸緩沖液組成的試劑I和由膽固醇脂酶(CEH)、膽固醇氧化酶(COD)和過氧化物酶(POD)、4-氨基安替比林、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚、3-(N-嗎啡啉)-2-羥丙基磺酸緩沖液組成的試劑II，這種低密度脂蛋白膽固醇測定試劑，需要高濃度的二價金屬鹽(如鎂離子)，而這些二價金屬鹽和上述聚陰離子、糖化合物、非HDL脂蛋白形成的書絮狀復合物，而這些二價金屬鹽復合物，檢測完畢后被排泄，在排液管道中易與其他堿性廢液反應形成鹽而發生沉淀，造成管道堵塞，容易對自動分析儀造成不良影響及故障。

本發明的目的是為了解決上述技術的不足而提供一種使試劑能夠直接測定、無須標本前處理、不須沉淀和離心、不堵塞管道、穩定性強，測定結果受外界干擾小、測定精度高的低密度脂蛋白膽固醇測定方法及試劑。

為了達到上述目的，本發明所設計的低密度脂蛋白膽固醇測定方法，其特征是首先第一步利用多聚物和表面活性劑對低密度脂蛋白(LDL)的特異作用形成穩定復合物掩蔽，其它脂蛋白在缺乏偶聯劑條件下，在表面活性劑、膽固醇酶聯試劑作用下被反應清除；然后第二步通過加入表面活性劑釋放出低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，再在表面活性劑、膽固醇酶聯試劑作用下參于完整的Trinder反應，根據不同敏感的顯色劑，在波長546nm至700nm內選擇確定的波長處測得吸光度與低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量成正比，而求得低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量。為了在第一步反應中對低密度脂蛋白(LDL)的特異作用形成穩定復合物掩蔽，所述的多聚物是聚乙烯硫酸鹽或中性多聚物PEGME或硫酸葡聚糖或α-磺化環糊精及其相互組合。

根據本發明所提供的低密度脂蛋白膽固醇測定方法而提供的一種低密度脂蛋白膽固醇測定試劑，它分為兩個組份A、B，由膽固醇脂酶(CEH)、膽固醇氧化酶(COD)和過氧化物酶(POD)組成的膽固醇酶聯試劑和4-氨基安替比林可以全部設在A組份中，也可以全部設在B組份中或A、B組份中分別設置；A、B組份的其它成份組成可以是：

A組份：

???緩沖液???????????????????????5-500mmol/L

???多聚物???????????????????????0.1mg-5000mg/L

???防腐劑???????????????????????0.005-10g/L

???穩定劑???????????????????????0.05-500g/L

???表面活性劑???????????????????0.05g-10g/L

???去干擾劑?????????????????????0.005-5mmol/L或0.1-5KU/L

B組份：

???緩沖液???????????????????????5-500mmol/L

???表面活性劑???????????????????0.05-10g/L

???顯色劑???????????????????????0.1-10mmol/L

???穩定劑???????????????????????0.03-300g/L

???防腐劑???????????????????????0.005-10g/L

根據多聚物的不同選擇，所述的低密度脂蛋白膽固醇測定試劑的A、B兩個組份可以是：