[發明專利]一種新型脂肪酶抑制劑

無效

• 申請號: 02117247.1
• 申請日: 2002-04-22
• 公開（公告）號: CN1391906A
• 公開（公告）日: 2003-01-22
• 發明（設計）人: 閻家麒
• 申請（專利權）人: 江蘇佩沃特生物基因工程有限公司;閻家麒;金尚明
• 主分類號: A61K35/74
• 分類號: A61K35/74;A61P3/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

肥胖是一種世界范圍的常見病，隨著經濟發展和生活水平的不斷提高，發病率日益上升。肥胖能引起多種代謝異常，是糖尿病與心血管疾病的主要危險因素之一，并與心血管疾患的發病率與死亡率增高有關。傳統上基于飲食和運動對肥胖癥的非藥物治療的長期療效往往十分有限。在藥物治療中，中藥制劑目前尚無療效確切的品種，國外的芬氟拉明與右旋芬氟拉明因出現超聲心動圖下可見的瓣膜病變，該兩藥已于1997年撤出市場。1998年問世的食欲抑制劑西布曲明(sibutramine)是5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取的抑制劑，它主要作用于神經系統，使人產生厭食，從而通過減少營養來達到減肥目的。該藥可能引起患者血壓升高、心率加快，且不能應用于具有冠心病、心率失常和卒中等病史的患者中，而使該藥的應用受到了限制(Stone?NJ?et?al.Med?Clin?North?Am，2000，84：95～102)。肥胖的發生，除肥胖基因(Ob)基因的調控之外，主要是脂肪酶的作用。特別是胰脂肪酶，作用部位在胃腸道。該酶可以先將攝入的脂肪乳化成極小的脂肪球，然后將其轉化成游離脂肪酸和甘油三油酸酯，它們與膽鹽相結合，形成膠束，膠束穿透腸壁細胞膜，攝入體內堆積成脂肪組織。本發明的脂肪酶抑制劑可以抑制脂肪酶的活性，使脂肪不轉化、吸收，直接從糞便中排出。它是一種新型減少營養吸收劑，作用于胃腸道，為胰腺酶和其他脂肪酶抑制劑，主要阻止脂肪酶的催化分解，抑制由飲食攝入的1/3的脂肪吸收。適用于肥胖癥，包括健康肥胖者及有II型(非胰島素依賴性)糖尿病的肥胖者。

本發明的新穎性在于①一種具有高度選擇性、長效的胃腸道脂肪酶抑制劑，與胃和胰腺中脂肪酶活性位點的絲氨酸殘基共價鍵合，從而阻斷脂肪和水的吸收，不影響神經系統和胃腸道的其他酶活性。②該脂肪酶抑制劑是由鏈霉菌屬微生物經誘變育種，發酵產生的次生代謝產物，為一種脂肪酶的抑制劑，而非化學合成化合物。③該種脂肪酶抑制劑與其他減肥藥不同，它不作用于神經系統，對心血管無不良影響。④該酶作用于胃腸道，但不被胃腸道吸收。本發明的脂肪酶抑制劑是通過抑制脂肪酶活性達到減肥的目的。

實施例

1、菌種

出發菌株為由土壤中分離的鏈霉菌屬的丁香鏈霉菌(Streptomvcessyringae)，經紫外線誘變育種，得到的高產變異菌株作為出發菌種，保存在瓊脂斜面培養基上。瓊脂斜面培養基的成分為：可溶性淀粉10g，KNO₃2g，NaCl?2g，K₂HPO₄·7H₂O，MgSO₄·7H₂O?50mg，CaCO₃?20mg，FeSO₄·7H₂O?10mg，瓊脂20g，蒸餾水加至1L，pH7.0。

2、搖瓶種子培養

搖瓶種子培養基成分為：脫脂大豆粉10g，甘油10g，酵母浸膏5g，加水至1L，調pH7.0。滅菌后，取100ml裝入500ml搖瓶，塞上棉塞后再次滅菌。用鉑環接種Streptomvces?syringae斜面菌種的孢子，28℃下通氣培養24h。

3、二級種子培養

將搖瓶種子培養基100ml接種至裝有25L生產培養基的50L發酵罐內。生產培養基的成分為：每升含脫脂大豆粉32g，甘油20g，蛋白胨2g，核糖10g，(NH₄)₂SO₄?2g，聚乙二醇0.25ml(作為消泡劑)，調pH7.4，28℃下培養72h，通氣量0.5vvm。

4、中試發酵培養

將25L二級種子培養基轉入裝有500L生產培養基的1噸發酵罐內，于28℃下，通氣量0.5vvm，發酵96h。放罐后使發酵液冷卻至2℃，離心收集菌絲體，于-20℃下冷凍保存。

5、粗提

菌絲體于4℃下融化，加2倍量甲醇機械磨碎勻漿處理30min，抽濾，濾餅再用等量甲醇勻漿30min，抽濾，合并濾液。使之濃縮至原體積的1/3，加1倍量水稀釋。然后用等量的己烷-乙酸乙酯(1∶1)提取3次(第2次和第3次提取時各用NaCl破乳化)，最后用乙酸乙酯提取。合并有機提取液，減壓濃縮，通過無水硫酸鈉干燥，真空干燥，得淺棕色油狀物，為粗品I。

6、3步層析純化