[發明專利]人腺苷酸環化酶相關蛋白編碼序列、其制備方法及用途

無效

• 申請號: 02111410.2
• 申請日: 2002-04-18
• 公開（公告）號: CN1374405A
• 公開（公告）日: 2002-10-16
• 發明（設計）人: 余龍;唐麗莎
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/68;C12Q1/527
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛

技術領域

本發明涉及基因工程領域，具體地，本發明涉及一種新的人基因核苷酸序列。更具體地說，本發明涉及人腺苷酸環化酶相關蛋白的cDNA序列以及該序列編碼的多肽。本發明還涉及所述多核苷酸序列和所述多肽的生產方法，以及這些多核苷酸和所述多肽的用途。

背景技術

生物體無時無刻不與周圍環境發生著聯系，進行著交流和協調，以保持其與環境以及本身內部的平衡與統一。當生物體受到外界刺激后，會將這種刺激通過細胞中各種信號轉導途徑傳遞到一定部位，產生各種生物效應。信號傳導調節和控制著許多生命過程，諸如生物體的生長、發育、神經傳導、激素和內分泌作用、學習與記憶、疾病、衰老與死亡等等。

cAMP是信號通路中的眾多傳遞者之一，在細胞信號傳導中起重要作用。腺苷酸環化酶(Adenylate?cyclase)是細胞中cAMP信號通路的催化單位。它結合在質膜上并跨越質膜十二次，是由大約1100個氨基酸殘基組成的糖蛋白。該酶含有兩個功能域：一個N末端的催化功能結構域和一個C末端的調控結構域。有兩個高度保守區域：第一個位于催化結構域中，第二個在調節結構域中，后者含有一個保守的組氨酸，該組氨酸可被PTS系統的IIA酶磷酸化，從而激活整個環化酶。腺苷酸環化酶的作用是在Mg²⁺或Mn²⁺存在下的條件下催化ATP生成3’，5’-環腺苷酸(cAMP)。作為cAMP信號通路的胞內第二信使的cAMP，在細胞內的濃度(正常狀況下≤10^-6mol/L)應該被嚴格的控制，并且能夠對細胞外信號產生快速的應答。例如當刺激型激素存在時，cAMP水平在1秒鐘內增加5倍以上。細胞內另一種類型的酶即環核苷酸磷酸二酯酶(PDE)可快速的降解cAMP生成5’-腺苷酸(5-AMP)，使細胞內cAMP水平下降。

cAMP信號通路的最后一個化學反應是通過蛋白激酶A完成的。CAMP特異性的活化蛋白激酶A，活化的蛋白激酶A即可使特殊的蛋白磷酸化。依賴于cAMP的蛋白激酶A將ATP末端的磷酸轉移到底物蛋白的絲氨酸或蘇氨酸殘基上。許多酶被蛋白激酶A磷酸化后，酶的活性提高；另一些酶被磷酸化后，酶活性降低。

每個蛋白激酶A由兩部分組成：兩個催化亞基和兩個調節亞基。不存在cAMP時，催化亞基和調節亞基形成一個鈍化復合物。cAMP與調節亞基結合，改變了調節亞基的構象，使調節亞基和催化亞基解離，催化亞基釋放。被釋放的蛋白激酶A的催化亞基轉為到細胞核中并磷酸化一種稱為CREB的蛋白(binding?protein?of?cAMP-responseelement，與cAMP應答元件結合的蛋白)的絲氨酸殘基。被磷酸化的CREB作為基因調節蛋白識別靶基因上的基因調節序列CRE(cAMP-response?element，cAMP應答元件)并與之結合調節靶基因的表達。通過靶基因表達產物把外界刺激轉變為信號逐級傳遞，進而影響整個生物體的生理活動。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種新的多核苷酸，該多核苷酸編碼轉運蛋白家族的一個新成員，本發明的蛋白被命名為人腺苷酸環化酶相關蛋白(human?adenylate?cyclaselike，hACL)。

本發明的另一個目的是提供一種新的轉運蛋白家族成員，該蛋白被命名為人hACL。

本發明的再一個目的是提供一種利用重組技術生產所述的人hACL的方法。

本發明還提供了hACL基因序列和多肽的應用。

在本發明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，它包括：編碼具有人hACL蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.1中從核苷酸1040-1519位的核苷酸序列有至少90％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.1中從核苷酸1040-1519位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼一多肽，該多肽具有SEQ?ID?NO.2所示的序列。更佳地，該序列具有SEQ?ID?NO.1中從1040-1519位的核苷酸序列。

在本發明的另一方面，提供了一種分離的hACL蛋白多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.2氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?IDNO.2序列的多肽。

在本發明的另一方面，提供了一種載體，它含有上述分離出的DNA。

在本發明的另一方面，提供了一種所述載體轉化的宿主細胞。

在本發明的另一方面，提供了一種產生具有hACL蛋白活性的多肽的方法，該方法包括：