[發明專利]具有腫瘤細胞特異性感染和轉基因表達能力的新型腺病毒

無效

• 申請號: 02108531.5
• 申請日: 2002-03-26
• 公開（公告）號: CN1380420A
• 公開（公告）日: 2002-11-20
• 發明（設計）人: 安德烈·利伯;梁旻;德克·S·施泰因沃德;謝里爾·A·卡爾森;米杰
• 申請（專利權）人: 上海三維生物技術有限公司;艾維亞醫藥/生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N7/01;A61K39/235;A61P35/00
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 丁業平,王維玉

1、一種至少缺少E1和/或者E3基因的重組腺病毒載體，含有：

a)外源DNA序列

b)一對反向重復序列，連接于外源DNA序列序列兩側；

所述的反向重復序列在兩個相同腺病毒載體的反向重復序列之間介導相互的同源重組。

2、一種獲得解離的重組腺病毒載體的方法，包括：在適合的環境條件下，將至少兩個權利要求1所述的親本重組腺病毒載體導入一個復制活性細胞中，這樣兩個載體在轉導的復制活性細胞中可以發生同源重組，進而生成解離的重組腺病毒載體。

3、通過權利要求2所述的方法產生的解離的重組腺病毒載體。

4、一種至少缺少E1和/或者E3基因的重組腺病毒載體，含有：編碼一個目標基因的DNA序列的第一段部分，這個DNA序列與在另一個重組腺病毒載體中編碼同一個目標基因的DNA序列的第二段部分發生同源重組，重組后形成一個完整的基因，它可以表達目的蛋白。其中，第二個DNA序列與第一個序列有部分的重疊區，在這個重疊區域兩個DNA片斷發生同源重組。

5、一種獲得解離的重組腺病毒載體的方法，包括：在適合的環境條件下，將至少兩個權利要求4所述的親本重組腺病毒載體導入一個復制活性細胞中，這樣兩個載體在轉導的復制活性細胞中可以發生同源重組，進而生成解離的重組腺病毒載體。

6、通過權利要求5所述的方法產生的解離的重組腺病毒載體。

7、權利要求2或5中所述的方法，其中所述的復制活性細胞是腫瘤細胞。

8、一個重組腺病毒載體，由兩條反向平行的DNA鏈組成，其中第一條鏈的組成如下：

a)腺病毒左端反向末端重復序列；

b)位于左端反向末端重復序列的3｀端的腺病毒包裝序列；

c)位于腺病毒包裝序列3｀端的啟動子序列；

d)第一反向重復序列，位于啟動子序列3｀端；

e)位于第一個反向重復序列3｀端的外源DNA序列，方向是由3｀端到5｀端；

f)第二反向重復序列，位于外源序列(e)的5｀端；

g)負責腺病毒在被轉導細胞中復制的一個或者幾個基因，它(它們)位于第二個反向重復序列的3｀端；

h)腺病毒右端反向末端重復序列，它位于被轉導細胞中負責腺病毒復制的基因的3｀端；

第二條鏈選擇性地包含編碼腺病毒纖維蛋白的序列，該蛋白使得所述的腺病毒載體靶向特定的宿主細胞。

9、權利要求8中的重組腺病毒載體，進一步包含一個位于第一個反向重復序列3｀端的雙向轉錄終止位點序列。

10、權利要求8中的腺病毒載體，其中啟動子具有腫瘤特異性。

11、權利要求8中的腺病毒載體，其中腫瘤特異啟動子是勞氏肉瘤(Rous?Sarcoma)病毒啟動子序列。

12、權利要求9中的腺病毒載體，其中終止位點是一個SV40病毒的雙向多聚腺苷序列。

13、權利要求8中的腺病毒載體，其中終止位點是一個合成的雙向多聚腺苷序列終止位點。

14、權利要求8中的腺病毒載體，其中在外源DNA序列兩側的成對的反向重復序列是相同的序列。

15、權利要求8中的腺病毒載體，其中在外源DNA兩側的反向重復序列是可切割的。

16、權利要求8中的腺病毒載體，其中在外源DNA序列兩側的反向重復序列是一個β-球蛋白內含子序列，不含任何轉錄及翻譯終止位點。

17、權利要求15中的腺病毒載體，其中在外源DNA序列兩側的反向重復序列是提供和接收結合位點的拷貝。

18、權利要求8中的腺病毒載體，其中外源DNA序列表達一個或多個基因產物，包括治療基因，選擇基因和/或報告基因。

19、權利要求18中的腺病毒載體，其中的基因是治療基因，包括細胞凋亡基因，細胞裂解基因，自殺基因，顯性負性I-k-β，胱天蛋白酶，γ球蛋白、人α-1抗胰蛋白酶基因。

20、權利要求18中的腺病毒載體，其中的基因是選擇基因，包括新霉素、氨芐青霉素、青霉素、四環素、慶大霉素基因。