[發明專利]人類胱氨酸結多肽

無效

• 申請號: 01803827.1
• 申請日: 2001-01-17
• 公開（公告）號: CN1395580A
• 公開（公告）日: 2003-02-05
• 發明（設計）人: S·莫塞爾曼;P·J·斯派克范德爾
• 申請（專利權）人: 阿克佐諾貝爾公司
• 主分類號: C07K14/59
• 分類號: C07K14/59;C12N15/63
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 李華英

本發明涉及一種編碼新型多肽的多核苷酸、由該多核苷酸編碼的蛋白質以及表達該蛋白質的重組細胞。

來源于腦垂體的促卵泡激素(FSH)、黃體生成素(LH)和促甲狀腺素以及來源于胎盤的人絨毛膜促性腺激素(hCG)屬于糖蛋白激素家族。這些激素具有異二聚體結構并且含有兩個非共價連接的α和β亞基。所述α亞基的氨基酸序列相同，而β亞基的氨基酸序列不同而且賦予各促性腺激素以生物學特異性(Ulloa-Aquirre，1988，1995)。二聚體被證實具有生物學活性。α和β亞基都被糖基化并且含有N-連接的糖鏈。HCG在C-末端肽上含有四個附加的O-連接的糖。

FSH，LH和TSH存在于大多數脊椎動物體內并且通過腦垂體進行合成和分泌。目前只在包括人在內的靈長類和馬中發現有CG存在并且CG是通過胎盤組織合成的。

在一個物種內，糖蛋白激素家族中的每個成員的α亞基基本相同；從種到種之間，α亞基也是高度保守的。每個成員，即CG，FSH，TSH和LH的β亞基不相同，但卻顯示出相當高的結構同源性。而且，從種到種之間，β亞基也是高度保守的。在人體中，成熟的α亞基由92個氨基酸殘基組成，而每個成員的β亞基大小不同：在hFSH中，由111個殘基組成，在hLH中，由121個殘基組成，在hTSH中，由118個殘基組成以及在hCG中，由145個殘基組成(Combarnous，Y.(1992)，內分泌綜述(Endocrine?Reviews)，13，670-691，Lustbader，J.W.等(1993)，內分泌綜述(Endocrine?Reviews)，14，291-311)。hCG的β亞基比其它β亞基大的多，其在C-末端具有被本文稱作羧基末端蛋白(CTP)的34個附加氨基酸。

異二聚體的兩個亞基具有多個保守的亞基內二硫鍵：在α亞基內具有五個二硫鍵，而在β亞基內具有六個二硫鍵。促性腺激素家族的所有成員中，相應的半胱氨酸殘基是完全保守的。在hCG的β亞基內，二硫鍵在9-57；23-72，26-110，34-88，38-90和93-100位點上的半胱氨酸之間形成。hCG的X-射線結構表明這些二硫鍵與被稱作二硫結(knots)的典型三維模式相關聯。所述激素具有三個或四個能被N-糖基化的天冬酰胺殘基。另外，hCG的C-末端肽(CTP)可以在四個絲氨酸位點被O-糖基化。

所述糖蛋白激素在包括新陳代謝、體溫調節和生殖過程在內的多種身體功能中起著重要的作用。例如腦垂體促性腺激素FSH在刺激卵泡發育和成熟的過程中起著關鍵的作用，而LH誘導排卵(Sharp，R.M.(1990)，臨床內分泌學(Clin?Endocrinol.)，33，787-807；Dorrington和Armstrong(1979)，激素研究的最新進展(Recent?Prog.Horm.Res.)，35，301-342)。目前，FSH在臨床上已單獨或與LH活性聯合用于刺激卵巢，即對卵巢進行過度刺激以進行體外受精(IVF)和在不育無排卵婦女中誘導體內排卵(Insler，V.(1988)，國際生育雜志(Int.J.Fertility)，33，85-97，Navot和Rosenwaks(1988)，體外受精胚胎轉移雜志(J.Vitro?Fert.Embryo?Transfer)，5，3-13)，以及用于雄性性腺機能減退。受控制的超排卵的目的在于增加可收回的成熟卵母細胞的數目以用于IVF以及隨后的胚胎轉移(ET)。通常，每次轉移多達三個胚胎被替換。由于通常必須進行多于一次的處理，所以在大多數不育癥診所中將多余的胚胎或受精的卵母細胞冷凍并在后來的循環中進行轉移。

TSH可用于需要補充甲狀腺素的患者，例如用于甲狀腺部分或全部切除了的甲狀腺癌病人。

已經制備出所有亞基的基因組和cDNA克隆并且已經解析出它們的初級結構。而且，已經用人促性腺激素亞基基因轉染了中國倉鼠卵巢(CHO)細胞并且已經證實了這些細胞能夠分泌完整的二聚體(例如Keene等(1989)，生物學化學雜志(J.Biol.Chem.)，264，4769-4775；Van?Wezenbeek等(1990)，從克隆到臨床(From?clone?to?Clinic)(eds?Crommelin?D.J.A.和Schellekens?H.，245-251))。

原則上，受精的調控可在幾個階段受到影響，例如卵泡募集，卵泡形成，植入和維持妊娠。