[發(fā)明專利]生產(chǎn)γ－谷氨酰半胱氨酸的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 01802107.7
• 申請(qǐng)日: 2001-05-24
• 公開（公告）號(hào): CN1386134A
• 公開（公告）日: 2002-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 西內(nèi)博章;佐野公一朗;杉本玲子;上田要一
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 味之素株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N1/16
• 分類號(hào): C12N1/16;C12N1/19;C12N15/52;C12P1/02;//A23L1/28
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉玥

發(fā)明背景

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及含高濃度γ-谷氨酰半胱氨酸的酵母和酵母提取物以及培育這種酵母的方法。用其制備的γ-谷氨酰半胱氨酸和半胱氨酸用于食品業(yè)。

相關(guān)技術(shù)描述

半胱氨酸用于增進(jìn)食品香味等。已知有蛋白水解法、半人工合成法等方法生產(chǎn)半胱氨酸，目前主要使用的方法是蛋白水解法和半人工合成法。為了將半胱氨酸用于增進(jìn)食品香味，希望找到含高濃度半胱氨酸的天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(food?materials)。但目前為止幾乎還沒有發(fā)現(xiàn)這樣的天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

谷胱甘肽是半胱氨酸與谷氨酸和甘氨酸鍵合組成的的三肽，已知它也用于增進(jìn)食品香味。半胱氨酸通過(guò)γ-谷氨酰半胱氨酸合成谷胱甘肽。但是，γ-谷氨酰半胱氨酸幾乎不用于增進(jìn)食品香味。

γ-谷氨酰半胱氨酸是在γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH1)的作用下由半胱氨酸和谷氨酸合成。而谷胱甘肽是在谷胱甘肽合成酶(GSH2)的作用下由γ-谷氨酰半胱氨酸和甘氨酸合成。

曾報(bào)道一種稱作釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)YHT178的酵母菌株，該菌株的γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因啟動(dòng)子被一個(gè)強(qiáng)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子ΔP8替代，其細(xì)胞中產(chǎn)生大量γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(Yasuyuki?Ootake等，Bioscince?and?Industry，第50卷，第10期，第989-994頁(yè)，1992)。此外，Ootake等人在另一篇文章中也報(bào)道，在一種谷胱甘肽合成酶缺陷菌株釀酒酵母YL1中沒有檢測(cè)到谷胱甘肽(Yasuyuki?Ootake等，Agricultural?and?Biological?Chemistry，第12卷，第54期，第3145-3150頁(yè)，1990)。

Inoue等人報(bào)道了位于染色體上的谷胱甘肽合成酶基因被破壞(Yoshiharu?Inoue等，Biochimica?et?Biophysica?Acta，第1395期，第315-320頁(yè)，1998)。認(rèn)為該破壞的基因編碼谷胱甘肽合成酶，其中第1-396位的氨基酸殘基正確翻譯，但缺失第397位開始的C末端區(qū)。Inoue等人報(bào)道，檢測(cè)了所述基因被破壞的菌株的谷胱甘肽含量，但是沒有檢測(cè)到谷胱甘肽。

此外，盡管已知可以通過(guò)在γ-谷氨酰半胱氨酸中加入一種糖并加熱得到一種香味組合物(日本專利公開(Japanese?Patent?Laid-openPublication(Kokai)第4-91762號(hào))，但不知道在加熱γ-谷氨酰半胱氨酸時(shí)是否釋出半胱氨酸。

如上所述，已有關(guān)于增強(qiáng)γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的表達(dá)和破壞阻斷谷胱甘肽合成酶基因的報(bào)道。但是，在所述已獲得的釀酒酵母菌株中或者γ-谷氨酰半胱氨酸的含量低或者不能良好生長(zhǎng)，因而認(rèn)為它們不能完全滿足工業(yè)生產(chǎn)所需的要求。

有報(bào)道指出，γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的表達(dá)增強(qiáng)的YHT178菌株在合成基本培養(yǎng)基中其細(xì)胞中最多可以積累1.69％的γ-谷氨酰半胱氨酸(Ootake等，Bioscience?and?Industry，同上)。但是，該報(bào)道沒有給出所述酵母菌在該培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)率。雖然報(bào)道了所述酵母菌在營(yíng)養(yǎng)較合成基本培養(yǎng)基更豐富的YPD培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)率，卻不能就此說(shuō)在YPD培養(yǎng)基中已達(dá)到工業(yè)水平所要求的生長(zhǎng)率。

進(jìn)一步，所報(bào)道的谷胱甘肽合成酶基因被破壞的YL1菌株中γ-谷氨酰半胱氨酸含量低至0.533％，不能應(yīng)用于工業(yè)實(shí)際生產(chǎn)中(Ootake等，Agric.Biol.Chem.，同上)。另外，Chris等人指出，既然YL1菌株的表型與一種谷胱甘肽合成酶被部分減弱的菌株相似，那么其谷胱甘肽合成酶也沒有完全消除(Chris?M.Grant等，Molecular?Biology?ofthe?Cell，第8卷，第1699-1707頁(yè)，1997)。但是，既然YL1菌株在含谷胱甘肽和不含谷胱甘肽的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)其對(duì)數(shù)期增殖能力顯著不同，那么它與本發(fā)明中谷胱甘肽合成酶減弱菌株有本質(zhì)的不同。

此外，曾報(bào)道當(dāng)檢測(cè)由Inoue等人(同上)制備的谷胱甘肽合成酶基因破壞菌株的谷胱甘肽含量時(shí)，沒有檢測(cè)到谷胱甘肽。

??????????????????????發(fā)明概述