[發明專利]檢測和殺傷上皮癌細胞的方法

無效

• 申請號: 01800660.4
• 申請日: 2001-02-27
• 公開（公告）號: CN1365288A
• 公開（公告）日: 2002-08-21
• 發明（設計）人: 塞繆爾·伯納爾;道格拉斯·D·伯克特;拉爾夫·E·格林;塞斯·D·羅斯
• 申請（專利權）人: 日拉公司
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K31/54;A61B10/00
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉新宇,黃健

相關申請

本申請是未決的國際申請PCT/US00/05387的部分繼續，國際申請于2000年2月28日遞交，名稱為“檢測和殺傷上皮癌細胞的方法”。

發明領域

本發明涉及檢測上皮癌的方法。

本發明的另一方面是涉及選擇性殺傷上皮癌細胞的方法。

在更進一步的方面，本發明涉及在正常細胞存在的情況下檢測上皮癌細胞和/或選擇性殺傷這種細胞的方法，其中癌細胞線粒體在足夠長的時間內保留線粒體標記劑，以識別和/或殺傷這種細胞。定義

本文使用的下列術語具有所指出的含義：

“癌”或“癌性的”細胞在廣義上使用，包括入侵的癌細胞，原位癌細胞和嚴重發育異常的細胞。

“線粒體標記劑”意指一種化合物，其被活的癌細胞的線粒體選擇性地吸收，并選擇性地在癌細胞中保留足夠的時間，使得識別和/或殺傷癌細胞，或使癌細胞喪失能力。

“殺傷”細胞意指或者引起細胞死亡、凋亡，或者引起細胞不能繁殖和轉移的改變。

“加合物”意指線粒體標記劑和癌癥化學治療劑的共價或非共價反應產物。

“佐劑”意指是線粒體標記劑，其與其它化學治療劑結合，協同地或通過與其他試劑的加和作用，使殺傷癌細胞的能力提高。

發明背景

使用選擇性“染色”因發育異常，過度增生，腫瘤發生和其它活性表面損傷引起的異常組織的染料組合物，檢測惡性和癌變前上皮損傷或癌瘤的體內診斷方法是本領域已知的。這些診斷方法使用將癌性底物染色的染料，癌性底物在可見光下是可檢測到的，或使用將底物染色的熒光染料，當用可見光譜以外波長的光照射時，底物是可檢測到的。

例如，在Chenz，中國口腔病學雜志(27：44-47(1992))和Filurin(口腔病學(俄羅斯)72：44-47(1993))中公開了使用熒光素和熒光素衍生物的方法。這些方法包括使用染料，接著在紫外光下檢查，以檢測選擇性發出熒光的癌/癌變前組織。另一種現有技術的方法包括用甲苯胺藍漂洗上皮，接著通過普通的視覺檢查檢測任何選擇性染色的組織。這種方法已被公開，例如在Burkett(美國6,086,852)，Tucci(美國5,372,801)和Mashberg(美國4,321,251)的專利中公開。以類似的方式使用其它噻嗪染料和惡嗪染料在Pomerantz的美國專利5,882,627中公開。

迄今為止，已經建立理論，認為這種染料選擇性“標記”癌性組織是因為染料保留在癌性組織細胞間相對較大的間隙空間中，而不能有效地透過正常組織較緊密的細胞內連接，或選擇性地保留在這種相對較小的空間中。

與甲苯胺藍因選擇性保留在癌細胞間相對較大的間隙中，從而選擇性標記癌上皮組織的看法相反，這種陽離子染料，例如若丹明、熒光素、惡嗪和噻嗪染料(包括甲苯胺藍)和其它陽離子超活體標記劑選擇性染色上皮組織的機制是，標記劑在癌細胞線粒體中被選擇性吸收和選擇性保留。這種選擇性的線粒體吸收和保留明顯是由于與正常細胞線粒體相比，癌細胞線粒體的較高電位(在膜內側上的負電荷)。參見，例如Chen等，癌細胞1/改變的表型，75-85(冷泉港實驗室，1984)；Lampidis等，癌癥研究43，716-720(1983)。事實上，超活體陽離子染料和其它超活體陽離子標記劑對癌細胞的選擇性標記和在癌細胞線粒體中的保留與癌細胞的一種特性有關，該特性看來是造成癌細胞快速克隆生長和轉移能力的原因，即，癌細胞線粒體的較高電位是細胞能量的來源，是細胞產生ATP(三磷酸腺苷)的驅動力。

發明概述

我們現已發現一種通過選擇性標記癌上皮細胞線粒體而在體內檢測癌上皮細胞的方法。

另一方面，我們發現一種在正常細胞存在的情況下選擇性殺傷癌細胞的治療方法。

我們的檢測方法包含下列步驟，將陽離子超活體線粒體標記劑遞送至上皮(其包含正常的和癌性的細胞)可疑癌性部位位點的組織，從而引起所述標記劑被吸收并選擇性保留在癌細胞的線粒體中。然后通過任何適宜的方法檢測癌細胞，例如，在可見光或所選擇的不可見光下，進行儀器或視覺檢查。

在又一實施方案中，標記劑被線粒體吸收后，在可疑癌性部位的位點使用漂洗試劑，從而提高標記劑自正常細胞線粒體釋放的速度，進而增加診斷方法的選擇性。