[發明專利]診斷未受孕用的試劑盒及使用該試劑盒診斷未受孕的方法

無效

• 申請號: 01140279.2
• 申請日: 2001-12-11
• 公開（公告）號: CN1379246A
• 公開（公告）日: 2002-11-13
• 發明（設計）人: 成煥厚;趙民;元裕德;金仁煜
• 申請（專利權）人: 株式會社綠十字;大韓民國(管理部署農村振興廳)
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/558
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 王維玉,丁業平

發明背景

1.發明領域

本發明涉及一種用于診斷動物未受孕的試劑盒以及使用該試劑盒診斷動物未受孕的方法，更具體地說，涉及一種通過檢測動物的血液、乳汁等中的黃體酮濃度，早期、簡便地診斷動物未受孕的試劑盒及方法。

2.對相關技術的描述

正常奶牛的發情周期是19-22天，且奶牛血液或乳汁中的黃體酮的濃度在發情日幾乎為0。從發情日起，黃體酮的濃度逐日提高，并且如果母牛沒有受孕，通常在發情日后的第19日降低至1ng/ml以下。另一方面，如果奶牛受孕了，則黃體酮的濃度不會降低。因此，可以通過檢測奶牛發情日后第19天至第22天之間未加工的乳汁或血液中的黃體酮濃度來確定奶牛是否受孕。

在二十世紀九十年代以前，通過專業人員在奶牛人工受精或交配后的50或60天給奶牛做直腸檢查確定奶牛是否受孕。但是，此種方法通常要求由經驗豐富的獸醫進行，并且因為需要較長的時間來確認奶牛未受孕而造成很大的經濟損失。此外，如果為診斷是否受孕而進行的直腸檢查刺激卵巢或胚胎，還有可能發生卵巢疾病或流產并且奶牛可能受到緊張的刺激。此外，根據上述方法，可以在人工受精后的50-60天確定未受孕。如果在這一時期奶牛被檢查出沒有受孕，則需要重新進行捕捉未受孕動物的發情征候和人工受精的過程，這將導致重大的經濟損失。

因此，從二十世紀九十年代以來，以簡單便利的方式診斷奶牛受孕或繁殖問題的方法被成功地開發出來，例如，一個例子是使用超聲波診斷裝置診斷受孕/未受孕的方法。但是，由于未受孕診斷的許多情況需要由非專業人員在野外進行，因此需要將超聲波診斷裝置制造得特別結實和安全。因此，此種方法裝置的缺陷是對于在野外使用太大且笨重。此后，一種通過檢測血液中的黃體酮的濃度而診斷母牛是否受孕的ELISA試劑盒被開發出來，但是由于要求使用一種昂貴且精密的分析裝置，且診斷方法復雜，在野外使用此種試劑盒也是困難的。

為克服這些缺陷并通過簡單的方法診斷未受孕，Laitinen等人開發出了一種使用化驗帶(assay?strip)的方法《斯堪的納維亞化學學報》(Acta?Chemica?Scandinavia，1996：50：141-145)。在設計該化驗帶時，將黃體酮的單克隆抗體固定在硝化纖維膜上，取自母牛的試樣(例如乳汁和血液)通過毛細吸引力穿過膜。此后，結合了膠態金粒子的黃體酮-卵清蛋白共軛體(以下稱“黃體酮金共軛體”)遷移通過膜。

此時，如果試樣中的黃體酮濃度水平較高，則黃體酮首先與黃體酮的單克隆抗體結合，黃體酮金共軛體無法與黃體酮的單克隆抗體結合而不能引起化驗帶的顏色變化。相反，當試樣中的黃體酮濃度水平較低時，只有少量的黃體酮的單克隆抗體與試樣中的黃體酮結合，稍后遷移的黃體酮金共軛體與黃體酮的單克隆抗體結合并引起化驗帶的顏色變化。因此，可以通過觀察化驗帶的顏色變化或使用色層分離掃描儀確定母牛是否受孕。

但是，上述方法的缺點是由于試樣和黃體酮金共軛體均需分別遷移通過化驗帶以分析受孕/未受孕，因此操作程序可能變得復雜。而且，當母牛受孕時，即當試樣中的黃體酮濃度水平高時，甚至在診斷完成以后，化驗帶的顏色也沒有變化并且無法防止由于化驗帶本身的缺陷而導致的錯誤。此外，使用肉眼觀察，由于沒有根據顏色變化診斷受孕/未受孕的客觀標準，就存在每個觀察者都需要進行主觀診斷的問題。

本發明概述

為克服這些缺陷，本發明的一個目的是提供一種用于診斷未受孕的改進型試劑盒，以及一種通過在受精后大約20天檢測血液或乳汁中的黃體酮的濃度而診斷母牛，例如奶牛未受孕的簡單方便的方法。

本發明的另一個目的是提供一種用于診斷未受孕的試劑盒，以及使用該試劑盒診斷未受孕并能夠防止由于化驗帶的缺陷而導致錯誤診斷的方法。

本發明的再一個目的是提供一種用于診斷未受孕的試劑盒，以及使用該試劑盒診斷未受孕并具有未受孕診斷的高度可靠性的方法。

為實現上述目標，本發明提供了一種用于診斷動物未受孕的試劑盒，其包括：一種包括多個試樣遷移孔的多孔膜紙帶形式的化驗帶，其中黃體酮-牛血清白蛋白(BSA)共軛體被固定在作為測試線的一端，并優選抗IgG被固定在作為對照線的另一端；以及用于與試樣，例如血液或乳汁反應的抗黃體酮IgG-金共軛體。