[發明專利]蛋白質的生產和蛋白質的輸送

無效

• 申請號: 01136069.0
• 申請日: 1994-06-02
• 公開（公告）號: CN1346887A
• 公開（公告）日: 2002-05-01
• 發明（設計）人: 道格拉斯·A·特科;邁克爾·W·哈特林;理查德·F·塞爾登
• 申請（專利權）人: 轉移染色體治療公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63;C12N15/67;C12N15/85;C12N15/90;C12N5/10;C12P21/00;A61K48/00
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 過曉東

1.一種DNA構建體，其在DNA構建體與細胞染色體DNA內的靶位點同源重組時改變細胞內的靶基因的表達，DNA構建體包括：

(a)與靶位點同源的導向序列；

(b)外源調節序列；

(c)外顯子；

(d)外顯子未配對的3’末端的未配對的剪接供體位點；

其中，導向序列與靶位點同源重組后，除了靶基因的所有內生外顯子外，細胞的染色體DNA還包括構建體-衍生的外顯子，其中靶基因編碼從下列組中選取的蛋白質，包括γ-干擾素，白細胞介素1，白細胞介素2，白細胞介素3，白細胞介素6，白細胞介素11，白細胞介素12，GSF-粒細胞(G-CSF)，CSF-巨噬細胞(M-CSF)，CSF-粒細胞/巨噬細胞(GM-CSF)，FSHβ，TGF-β，腫瘤壞死因子，胰高血糖素，骨生長因子-2，骨生長因子-7，TSH-β，蛋白激酶C，尿激酶，抗凝血酶III，DNA-se，α-半乳糖苷酶，酪氨酸羥化酶，血液凝血因子V，血液凝血因子VII，血液凝血因子X，血液凝血因子XIII，IL-2拮抗劑和可溶CD4。

2.依據權利要求1的DNA構建體，其中構建體衍生外顯子包括與靶基因的第一內生外顯子的DNA序列不同的DNA序列。

3.一種DNA構建體，其在DNA構建體與細胞染色體DNA內的靶位點同源重組時，改變細胞內的靶基因的表達，DNA構建體包括：

(a)與靶位點同源的導向序列；

(b)外源調節序列；

(c)外顯子；

(d)在外顯子3’末端的未配對的剪接供體位點；

其中，在導向序列與靶位點同源重組后，(b)-(d)位于靶基因的轉錄起始位點的上游，其中靶基因編碼從下列組中選取的蛋白質，包括γ-干擾素，白細胞介素1，白細胞介素2，白細胞介素3，白細胞介素6，白細胞介素11，白細胞介素12，GSF-粒細胞(G-CSF)，CSF-巨噬細胞(M-CSF)，CSF-粒細胞/巨噬細胞(GM-CSF)，FSHβ，TGF-β，腫瘤壞死因子，胰高血糖素，骨生長因子-2，骨生長因子-7，TSH-β，蛋白激酶C，尿激酶，抗凝血酶III，DNA-se，α-半乳糖苷酶，酪氨酸羥化酶，血液凝血因子V，血液凝血因子VII，血液凝血因子X，血液凝血因子XIII，IL-2拮抗劑和可溶CD4。

4.依據權利要求3的DNA構建體，其中外顯子包括與靶基因的第一內生外顯子的DNA序列不同的DNA序列。

5.依據權利要求3的DNA構建體，其中靶基因編碼α-半乳糖苷酶。

6.依據權利要求3的DNA構建體，其中構建體衍生的外顯子與FSHβ基因的第一外顯子相同。

7.依據權利要求6的DNA構建體，其中所獲得的細胞表達人類糖蛋白α-亞單位。

8.依據權利要求6的DNA構建體，其中細胞在外源啟動子的控制下表達人類糖蛋白α-亞單位。

9.依據權利要求3的DNA構建體，其中靶基因表達GM-CSF。

10.依據權利要求9的DNA構建體，其中構建體衍生的外顯子編碼GM-CSF前體蛋白的首先的50個氨基酸。

11.依據權利要求9的DNA構建體，其中構建體衍生的外顯子編碼包括官能信號肽的序列。

12.依據權利要求3的DNA構建體，其中靶基因編碼G-CSF。

13.依據權利要求12的DNA構建體，其中構建體衍生的外顯子編碼G-CSF信號肽的首先的13個氨基酸。

14.一種DNA構建體，其在DNA構建體與細胞染色體DNA內的靶位點同源重組時，改變細胞內的靶基因的表達，DNA構建體包括：

(a)與靶位點同源的導向序列；

(b)外源調節序列；

(c)外顯子；

(d)外顯子3’末端的未配對剪接-供體位點；

其中，在導向序列與靶位點同源重組后，(b)-(d)位于靶基因的轉錄起始位點的上游，其中外源調節序列是腺病毒基因的調節序列，膠原質基因的調節序列，肌動蛋白基因的調節序列，HMG-CoA還原酶基因的調節序列，或EF-1α基因的調節序列。