[發(fā)明專利]由培養(yǎng)的白細(xì)胞提取成分的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 01116895.1
• 申請(qǐng)日: 2001-04-18
• 公開（公告）號(hào): CN1381239A
• 公開（公告）日: 2002-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 松元司
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 松元司
• 主分類號(hào): A61K35/14
• 分類號(hào): A61K35/14;B01D45/12
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 楊宏軍

本發(fā)明涉及一種破壞血液中的白細(xì)胞細(xì)胞膜提取白細(xì)胞成分的方法。

以往，一般都認(rèn)為，血液中的紅細(xì)胞是以迅速而大量地運(yùn)搬氧和二氧化碳為主要任務(wù)，而白細(xì)胞則具有細(xì)菌吞噬作用。然而，在細(xì)菌大量存在之處的炎癥部位也有紅細(xì)胞聚集，可能在炎癥部位起到某種作用。此外，關(guān)于紅細(xì)胞和白細(xì)胞在炎癥部位的相互作用，現(xiàn)仍未被充分研究。本發(fā)明者使用以前申請(qǐng)專利的「紅細(xì)胞劃分法」(特愿平8-215552)，將紅細(xì)胞分為三層，對(duì)各層中所含的紅細(xì)胞與細(xì)菌之作用進(jìn)行了觀察。

使用上述申請(qǐng)專利的「紅細(xì)胞劃分法」所得的上層、中層、下層之紅細(xì)胞，分別添加于液體介質(zhì)中，觀察接種細(xì)菌而存活的紅細(xì)胞對(duì)細(xì)菌所起的作用。上層中所含的紅細(xì)胞對(duì)細(xì)菌會(huì)進(jìn)行攻擊，細(xì)菌沒有繁殖。次上層中遺留有白細(xì)胞，但并未發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞對(duì)細(xì)菌有何吞噬作用。中層中所含的紅細(xì)胞雖未見有攻擊作用，但細(xì)菌的繁殖卻得到了抑制。此中層中也有少量白細(xì)胞存在，但據(jù)觀察對(duì)細(xì)菌并不起任何作用。下層中所含的紅細(xì)胞沒有攻擊作用，細(xì)菌有所繁殖。下層中并未發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞。

炎癥一發(fā)生，或者血液中的白細(xì)胞增加，或者炎癥部位白細(xì)胞變得很巨大，由于此一現(xiàn)象，一般都認(rèn)為白細(xì)胞會(huì)吞噬細(xì)菌。如上述申請(qǐng)專利的「紅細(xì)胞劃分法」中所記載，觀察存活紅細(xì)胞和白細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的活動(dòng)與變化，認(rèn)為只有白細(xì)胞會(huì)攻擊細(xì)菌的以往的想法不見得是正確的。

以往，一般都認(rèn)為紅細(xì)胞是均一的血細(xì)胞成分，而白細(xì)胞則是具有核與細(xì)胞質(zhì)的真正的細(xì)胞，是在形態(tài)上，功能上各不相同的數(shù)種細(xì)胞的集合體。由形態(tài)與染色性將其分為中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單細(xì)胞五種。(東京化學(xué)同人、「生化學(xué)辭典」)以往進(jìn)行血液研究時(shí)檢查血液所采用的方法是，在玻璃板上滴一滴血液，再用另一塊玻璃板之一端鋪開，使其成一薄層，待此血液干燥后，用各種染色劑染色，再用顯微鏡觀察。然而，這種方法有如下缺點(diǎn)。(1)由于干燥，使細(xì)胞變成木乃伊狀。因此，對(duì)血細(xì)胞那樣敏感、柔軟易變的細(xì)胞進(jìn)行觀察，并不是適當(dāng)?shù)姆椒ā?2)染色法的場(chǎng)合，染不上的成分完全無法觀察。染色性不好的部份被忽視，相反地容易染色的部份則染得過深，微妙的變化無法觀察。(3)生物研究的場(chǎng)合，若不自始至終，盡可能長(zhǎng)期觀察，掌握其隨著時(shí)間而變化的狀態(tài)，即無法了解其真相。

以往使用法科爾·康雷法就可以對(duì)淋巴細(xì)胞進(jìn)行分離、提取，以淋巴細(xì)胞為中心的免疫系統(tǒng)也有人在進(jìn)行各種研究。本發(fā)明闡明，將健康人的淋巴細(xì)胞投予風(fēng)濕病患者，其效果并不大，而用同樣方法投予完全培養(yǎng)的白細(xì)胞，其效果卻極為顯著，在臨床方面也證實(shí)了用培養(yǎng)白細(xì)胞治療風(fēng)濕病的確有療效，并曾經(jīng)在許多學(xué)會(huì)(例如：1981年在巴黎舉行的國(guó)際風(fēng)濕病學(xué)會(huì))發(fā)表過。

一般都認(rèn)為，細(xì)胞老化而破壞時(shí)，會(huì)變成小小的水溶性物質(zhì)在血液中流動(dòng)，最后被搬運(yùn)到肝臟和腎臟。即使肝臟和腎臟具有最終處理老化廢物的機(jī)能，但其前一階段的細(xì)胞的分解和水溶化的過程尚未得到闡明。本發(fā)明者使用「紅細(xì)胞劃分法」所得的三層紅細(xì)胞液的下層液(不含白細(xì)胞的血細(xì)胞群)，對(duì)白細(xì)胞的老化廢物排泄作用進(jìn)行了觀察。即，在下層液中加入同一血型的冷凍白細(xì)胞和存活白細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。其結(jié)果表明，血細(xì)胞細(xì)胞比未加入白細(xì)胞時(shí)更加細(xì)分化，而且已經(jīng)水溶化。另外，加入冷動(dòng)保存的白細(xì)胞比加入存活白細(xì)胞，其效果更加顯著。這表明如下兩種機(jī)能：白細(xì)胞具有將死滅的紅細(xì)胞作為老化廢物加以處理的機(jī)能。另外，由冷凍保存的白細(xì)胞效果較佳一事，可以推斷破壞白細(xì)胞的細(xì)胞所得的白細(xì)胞之內(nèi)部成分起到某種作用。

由健康人采取、培養(yǎng)的白細(xì)胞對(duì)風(fēng)濕病等某些疾病有其療效，已經(jīng)在臨床試驗(yàn)中得到證實(shí)，實(shí)際上要治療時(shí)必需對(duì)培養(yǎng)血液進(jìn)行各種檢查(例如：AIDS病毒的有無)，而其由于無菌培養(yǎng)的費(fèi)事及設(shè)備、治療費(fèi)用極為高昂。以現(xiàn)在的試驗(yàn)治療為例，按4周1次的頻率使用培養(yǎng)白細(xì)胞，以6次為1療程，最少4療程為宜。一次的費(fèi)用大約需要5萬(wàn)日?qǐng)A，4療程大約就要120萬(wàn)日?qǐng)A。這在經(jīng)濟(jì)上是個(gè)相當(dāng)大的負(fù)擔(dān)，現(xiàn)階段的治療主要使用副作用較大的類固醇劑及只有暫時(shí)鎮(zhèn)痛效果的消炎鎮(zhèn)痛劑來解決此一問題。

根據(jù)上述觀察結(jié)果，如果能夠闡明白細(xì)胞內(nèi)的成分和紅細(xì)胞的相互作用及其對(duì)細(xì)菌的作用，以及白細(xì)胞與白細(xì)胞成分的細(xì)胞老化廢物處理作用等，提取其成分或加以合成，即可獲得副作用沒有抗生素及類固醇劑那么強(qiáng)烈、價(jià)格低、療效高(例如：可以治療癌、肝病、腎病，同時(shí)也可望使肝臟移植、腎臟移植大為減少)的藥劑。

基于上面所述、本發(fā)明之目的在于提供，在近乎活體的狀態(tài)下，將白細(xì)胞成分由培養(yǎng)白細(xì)胞中加以分離、提取的方法，以闡明白細(xì)胞之作用及效果。