[發明專利]生物組織單細胞的震動分離方法及分離裝置

無效

• 申請號: 01113590.5
• 申請日: 2001-04-27
• 公開（公告）號: CN1384186A
• 公開（公告）日: 2002-12-11
• 發明（設計）人: 徐天樂;伍龍軍;孔令芳
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12M3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物組織細胞的分離方法技術領域，特別涉及機械分離裝置。

據美國《神經科學雜志》(1983年第3卷1888-1899頁)報道，目前，應用于果蠅幼蟲中樞神經元獲取單細胞的分離方法是通過各種蛋白酶和膠原酶等酶類對組織進行酶解，但這種常規的酶解方法代價高昂且費時。英國《自然》雜志(1977年第265卷751-753頁)指出，酶解方法中用到的蛋白酶和膠原酶等酶類對細胞表面的一些蛋白有一定的消化作用，因而使分離出的單細胞并不能很好地反映生理狀態下細胞的活性。英國《細胞培養進展》(1981年第1卷125-182頁)指出，雖然目前對果蠅卵、幼蟲、蛹均有系統的研究，然而由于成蟲中樞神經元單細胞用常規酶解方法難以獲得，所以至今尚未見到對果蠅成蟲單個神經元研究的報道。

本發明提出一種將單細胞從生物組織中分離出來的震動分離方法及其震動分離裝置，以克服現有酶解分離方法的上述缺陷。

圖1是本發明生物組織單細胞震動分離裝置的示意圖；

圖2是震動分離裝置中的震蕩器的電路圖。

本發明生物組織單細胞的震動分離裝置，其特征在于在震蕩器(I)上固定可隨之而震動的震動指針(II)，并將震蕩器(I)固定在操縱器(III)上；所述震蕩器(I)由穩壓電源(V)、波形發生器(VI)、功率放大器(VII)和熱筆記錄器(VIII)依次串聯組成；其中波形發生器(VI)由芯片ICL8038及外圍電路組成；通過外圍電路中配置的電阻和可變電容來改變震蕩的頻率；波形發生器(VI)發出的波形經功率放大器(VII)放大后通過一個電位器W與熱筆記錄器(VIII)相連，用于改變震蕩的幅度。

本發明將單細胞從生物組織中分離出來的震動分離方法，其特征在于：將所需分離的生物組織固定之后，使震動裝置上的震動指針以頻率為5-10Hz、幅度為100-200μm在組織上震動，從而獲取分離的單細胞。

與現有的酶解分離方法相比較，由于本發明采用的是震動分離方法是機械分離方法，不需要酶的作用，故可省去酶解所需花費的時間和精力，既非常經濟，又方便快捷；更為重要的是，機械分離方法克服了酶解帶給細胞本身消化作用造成的不利影響，使分離出的單細胞更接近在體的生理狀態且具有更高的活性。

本發明震動分離方法及裝置可用于各種生物組織的單細胞分離。特別是，發明人利用本方法及其裝置已分離出前人從未分離過的果蠅成蟲的中樞神經元；通過電生理學和藥理學的鑒定，證明這些果蠅中樞神經元具有良好的生理活性。這是用常規酶解方法所難以獲得的。

以下結合附圖說明本發明的具體實施方式。

圖1是本發明實施例中用于分離果蠅中樞神經元的震動分離裝置示意圖。

圖2是本實施例震動分離裝置中震蕩器的電路圖。

圖3是本實施例用震動方法分離的果蠅三齡蚴中樞神經元放大600倍的相差顯微鏡像，圖3中1和2、3和4、5和6分別表示果蠅三齡蚴中樞神經系統中I、II和III型神經元。

圖4中的1、2、3和4是從分離的果蠅三齡蚴II型神經元上記錄到的四種類型的全細胞電流。

圖5中的1、2和3依次分別是果蠅成蟲前腦和用震動方法分離的兩個果蠅成蟲中樞神經元放大600倍的相差顯微鏡像。

圖6中的1、2、3和4是從分離的果蠅成蟲神經元上記錄到的四種類型的全細胞電流。

實施例1：果蠅中樞神經元的震動分離

一、分離裝置

本實施例中采用的震動分離裝置，在震蕩器I上固定可隨之而震動的震動指針II，并將震蕩器固定在操縱器III上；其中的震蕩器I由L7809型穩壓電源V、波形發生器VI、TDA2030型功率放大器VII和上海七一醫療設備廠生產的熱筆記錄器VIII依次串聯組成；本實施例中的操縱器III采用的是日本那瑞氏(Narishige)公司生產的MM-3型機械式的微操縱器；也可選用其它如電動式的、液壓式的或壓電陶瓷式的微操縱器。熱筆式記錄器VIII固定在微操縱器III上，由玻璃管或玻璃棒拉制成的尖端約5-10μm的震動指針II固定在熱筆式記錄器VIII上；由波形發生器VI控制震蕩器II的頻率和幅度；將震蕩器I用鉚釘固定在微操縱器III上。