[發明專利]相輔脫氧核糖核酸的合成方法

有效

• 申請號: 01113524.7
• 申請日: 2001-04-10
• 公開（公告）號: CN1380421A
• 公開（公告）日: 2002-11-20
• 發明（設計）人: 朱遠源
• 申請（專利權）人: 朱遠源
• 主分類號: C12P19/34
• 分類號: C12P19/34;C07H21/04
• 代理公司: 南通市科偉專利事務所
• 代理人: 葛雷

1、一種cDNA的合成方法，其特征在于：包括下列步驟：

(1)用常規方法人工合成下列結構式的DNA-RNA或RNA供體分子：

5’-------------------^****3’，包括

①5’OOOOOOOOOOOOOO-GNGG3’

②5’OOOOOOOOOOOOOO-NGGG3’

③5’OOOOOOOOOOOOOO-NNGG3’

④5’OOOOOOOOOOOOOO-GNG3’

⑤5’OOOOOOOOOOOOOO-GGN3’

⑥5’OOOOOOOOOOOOOO-NGG3’

其中Poly＂O＂代表隨意DNA或RNA序列，包括25～35個堿基，是引物的結合部位；“G”代表RNA堿基G，“N”代表RNA堿基：A或T、G、C；

(2)用鼠源逆轉錄酶M-MLV采用常規方法以mRNA為模板合成第一鏈cDNA，在合成第一鏈cDNA的同時，加入上述供體分子，發生如下方式的逆轉錄和模板轉換反應：當合成第一鏈cDNA到達mRNA的5’端，第一鏈cDNA在3’端具有加尾功能而形成的cDNA受體分子，通過分子相輔結合，該受體分子接受反應液中的供體分子，逆轉錄酶繼續把供體分子作為模板繼續轉錄而合成一條和供體分子相輔的序列，即PCR通用序列；5’---------^****3’供體分子

???????????????????????????????????????????????PolyA尾??5’?---------------^****xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxAAAAAAAA3’??3’←--------------^****yyyyyyyyy?yyyyyyyyyyyyyyyyyT?TTT?T?TTT5’

??????????????????????????受體分子?????????????oligo-d(T)其中＂x＂代表mRNA，＂y＂代表第一鏈cDNA；

(3)用常規PCR擴增方法合成cDNA第二鏈，并生成大量擴增產物。5’端引物-----→5’??-------------------^****xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxAAAAAAAAAAA3’3’??-------------------^****yyyyyyyyyyyyyyy?yyyyyyyyyyyyyyTT?T?TTT?T?T5’

??????????????????????????????????????????????????????????←-------

??????????????????????????????????????????????????????????3’端引物