[發明專利]一種多肽——信使核糖核酸前體拼接因子－59.84和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01112921.2
• 申請日: 2001-05-17
• 公開（公告）號: CN1386751A
• 公開（公告）日: 2002-12-25
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——信使核糖核酸前體拼接因子-59.84，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

RNA的拼接是將內含子從mRNA前體剪除，并將外顯子連接成為成熟mRNA的過程，這個過程需要拼接酶、反式作用蛋白(如絲氨酸-精氨酸蛋白，即SR)、順式作用蛋白等一系列酶復合物(Horowitz和Krainer，1994)，通過拼接子有效濃度的調節可改變其拼接。[DNA?and?Cell?Biology，1997，16(6)：679-690]

果蠅tra-2是一RNA結合蛋白，含有一個RNA識別功能域(RRM)和兩個SR結構域。tra-2屬于SR蛋白家族(Fu，1995)，該家族成員均具有一個富含交替的Ser-Arg殘基的結構域，該結構域是拼接酶復合物的必要組成成分，在拼接的早期階段有重要作用(Krainer?et?al.，1990)，但該蛋白的SR結構域缺乏其它SR結構域皆有的保守功能域EFEDPRDAED。[DNA?and?Cell?Biology，1997，16(6)：679-690]1997年，BIRGIT?BEIL等人分離出一個與果蠅轉座子-2(TRA-2)同源的蛋白，命名為人htra2-β蛋白。它是一種核蛋白，和SC35以斑點模式共同定位于細胞核中。該蛋白是SR蛋白家族成員，其基因長21232bp，含10個外顯子和9個內含子，定位于3號染色體q區域。其轉錄起始密碼子的上游區域含有許多轉錄因子結合位點[Genomics?1998，536(2)：191-202]。另一種形式的htra2-β通過選擇性拼接而形成，它不具有SR結構域，這種拼接受htra2-β蛋白的活性調節。它們的最長開放閱讀框都由288個氨基酸組成，編碼一個等電點為9.8、分子量為33.6KD的堿性蛋白，其3′端非編碼區富含AU(30.1％A，35.7％U)長為948個核苷酸，含兩個AUUUA功能域，并且以多聚腺苷酸信號結尾。該種蛋白具有多個結構域：其一為氨基端的SR結構域，它位于和RNP-1、RNP-2有一致序列的RNA結合功能域結構域之后(Birney?et?al.，1993)，而含有甘氨酸連接子的RRM結構域位于它之后。該htra2-β基因在人大腦、腎臟、肝臟、脾臟、心臟、肺等組織器官中均有較高水平表達[DNA?and?Cell?Biology，1997，16(6)：679-690]。

htra2-β是人拼接因子，含有兩個分離的SR結構域，其中一個SR結構域定位在氨基端或羧基端(Birney?et?al.，1993；Fu，1995)，氨基端的SR結構域對于大多數tra-2的功能是必不可少的，在細胞外壓作用下的蛋白相互作用中有功能。作為一種RNA拼接因子，htra2-β對于RNA前體的剪接具有重要作用，若表達過量，會破壞RNA前體的成熟，影響蛋白質的合成及其功能，導致腫瘤等一系列疾病。此外，其在相關疾病的診斷和治療也有一定作用。(EMBOJ.，1998，17(7)：2095-2106)

在前體mRNA剪接內含子的兩步轉酯作用反應可能是被RNA催化的[Madhani，H.D.and?Guthrie，C.(1994)Annu.Rev.Genet.，28，1-26]。剪接發生在一個大的核糖核蛋白微粒中，剪接體聚集在許多參與發生在前體mRNA，小核仁核糖核蛋白微粒(snRNPs)和非小核仁核糖核蛋白因子之間的動態反應步驟中。

除了少數幾種蛋白，幾乎所有哺乳動物的剪接蛋白都參與剪接復合體積聚的早期過程。

本發明的新的多肽與已知的信使核糖核酸前體拼接因子在蛋白水平上具有28％的同源性和51％的相似性，并與之具有相似的結構特征，由此認為其是一種新的信使核糖核酸前體拼接因子，命名為信使核糖核酸前體拼接因子-59.84，并與已知蛋白具有相似的生物學功能。該蛋白在體內參與將內含子從mRNA前體剪除，并將外顯子連接成為成熟mRNA的過程，其突變或表達異常將導致相關蛋白表達異常，引起腫瘤等一系列疾病。此外，該蛋白還可用于診斷及治療上述各種疾病。