[發明專利]一種多肽——焦磷酸酶－8.91和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01112920.4
• 申請日: 2001-05-17
• 公開（公告）號: CN1386852A
• 公開（公告）日: 2002-12-25
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/48;C12Q1/68;A61K38/45
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——焦磷酸酶-8.91，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

無機的焦磷酸酶是一種用于焦磷酸水解的酶，而焦磷酸是許多利用ATP的生物合成反應的產物，也是最重要的磷代謝產物。眾所周知焦磷酸酶的催化作用需要二價的金屬離子，尤其是結合二價的鎂離子時活性最高。到目前為止，從不同生物體得到的許多焦磷酸酶已經被測序，這些生物體包括細菌如大腸桿菌及嗜熱細菌PS-3、真菌、植物以及牛的視網膜等。通過對焦磷酸酶進行氨基酸序列分析發現，該酶氨基酸序列中的賴氨酸可能是焦磷酸酶的活性位點，對于該酶的催化活性非常重要[Lahti?R.，Kolakowski?L.F.Jr.等(1990)Biochim.Biophys.Acta?1547：338-345]。

此外，酵母線粒體中的一種焦磷酸酶的同功酶被確定為與能量的產生相關，其催化功能的發揮需要ATP合成中的解偶聯劑的刺激。所有不同來源的焦磷酸酶的氨基酸序列中均含有如下所示的保守的一致性序列片段：

D-[SGDN]-D-[PE]-[LIVMF]-D-[LIVMGAC]該片段中的三個D為二價金屬陽離子的結合位點，對于酶功能的發揮必不可少。

由于如上所述焦磷酸酶-8.91蛋白在機體內重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的焦磷酸酶-8.91蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新焦磷酸酶-8.91蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——焦磷酸酶-8.91以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼焦磷酸酶-8.91的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼焦磷酸酶-8.91的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產焦磷酸酶-8.91的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——焦磷酸酶-8.91的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——焦磷酸酶-8.91的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與焦磷酸酶-8.91異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中195-440位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1547位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。

本發明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制焦磷酸酶-8.91蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發明的多肽。本發明還涉及用該方法獲得的化合物。

本發明還涉及一種體外檢測與焦磷酸酶-8.91蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本發明多肽的量或生物活性。

本發明也涉及一種藥物組合物，它含有本發明多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。

本發明還涉及本發明的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療癌癥、發育性疾病或免疫性疾病或其它由于焦磷酸酶-8.91表達異常所引起疾病的藥物的用途。

本發明的其它方面由于本文的技術的公開，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。