[發明專利]一種多肽——鋅金屬內切酶－41.25和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01112913.1
• 申請日: 2001-05-17
• 公開（公告）號: CN1386855A
• 公開（公告）日: 2002-12-25
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;C12N15/57;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/37;C12Q1/68;A61K38/47
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種多肽——鋅金屬內切酶-41.25，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

基質金屬蛋白酶是一群重要的包含鋅原子的金屬蛋白酶，它們負責細胞外基質組分的降解和參與一些疾病的發生過程，例如在正常胚胎發生和擾動中的膠原蛋白和蛋白聚糖以及關節炎、癌癥、齒根骨膜炎和骨質疏松癥。已定義的一個基質金屬蛋白酶家族包含至少7個蛋白成員，它們的分子量從28000到92000并且都與膠原蛋白酶有關。所有的家庭成員都是以酶原的形式分泌的，降解位于N末端約10,000道爾頓多肽片段后變成活性蛋白質。

基質金屬蛋白酶C末端下游有一個八肽區域，PRCGVPDV，其中包括兩個高度保守的氨基酸殘基。這個八肽區域參與基質金屬蛋白酶的自我抑制作用[ParkA.J.，Matrisian?L.M.，Kells?A.F.，Pearson?R.，Yuan?Z.，Nayre?M.J.Biol.Chem.266：1584-1590(1991)]。位于此區域內的一個半胱氨酸殘基通過它的三個硫醇基團螯合活性位點的鋅原子，從而抑制基質金屬蛋白酶的活性。[Springman，E.B.，Angleton，E.，etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87，364-368]。

哺乳動物胞外基質金屬蛋白酶是一種鋅依賴的酶，它們由細胞分泌為一種非活性形式(酶原)，這種酶原與成熟的酶不同，它有一個N端的前肽。這個前肽C末端的下游兩個氨基酸殘基處有一個高度保守的八肽。該區域參與基質的自身抑制；在這個八肽中有一個半胱氨酸殘基與活性位點的鋅離子螯合，從而抑制酶活性，該區域被稱為“半胱氨酸開關”或是“自身抑制區域”。該家族的特征序列模板為：P-R-C-[GN]-x-P-[DR]-[LIVSAPKQ]，其中的C與鋅離子螯合(Woessner?J.Jr.，FASEB?J.5：2145-2154(1991))。

本發明的新的多肽與已知的鋅金屬內切酶在蛋白水平上具有34％的同源性和48％的相似性，并與之具有相似的結構特征，由此認為其是一種新的鋅金屬內切酶，命名為多肽命名，并與已知蛋白具有相似的生物學功能。該蛋白在生物體內與蛋白的限制性內切作用密切相關，其突變或表達異常將導致相關蛋白結構及功能異常。其通常與各種相關的腫瘤、關節炎等疾病的發生密切相關。該蛋白還可用于診斷及治療上述各種疾病。

由于如上所述鋅金屬內切酶-41.25蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的鋅金屬內切酶-41.25蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新鋅金屬內切酶-41.25蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——鋅金屬內切酶-41.25以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼鋅金屬內切酶-41.25的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼鋅金屬內切酶-41.25的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產鋅金屬內切酶-41.25的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——鋅金屬內切酶-41.25的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——鋅金屬內切酶-41.25的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與鋅金屬內切酶-41.25異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中37-1164位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-2230位的序列。