[發明專利]一種枯草芽孢桿菌變異菌株的批量培養方法

無效

• 申請號: 01112787.2
• 申請日: 2001-04-27
• 公開（公告）號: CN1384187A
• 公開（公告）日: 2002-12-11
• 發明（設計）人: 吳自榮;郭大磊;黃靜
• 申請（專利權）人: 華東師范大學;昆山科新環境生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;//;C12R1125)
• 代理公司: 上海德昭專利事務所
• 代理人: 程宗德

本發明涉及一種枯草芽孢桿菌變異菌株(Bucillus?Subrilis?sp.)的批量培養方法，確切說，涉及一種枯草芽孢桿菌變異菌株1^#、2^#、3^#和4^#的批量培養方法，屬微生物菌體培養技術領域。

水產養殖池的池水主要受到二種污染：大量人類生活污水，如人畜糞尿、洗滌水等排入河、湖，使河、湖水中含有大量氨氮和硝基氮，上述池水汲自河、湖，該池水中也含有大量氨氮和硝基氮；上述池水還受到殘存飼料和水產品排泄物的污染，污染物所含的大分子有機化合物造成水體的富營養化和有毒藻類及細菌大量繁殖。上述二種污染導致水產品，如魚、蝦、蟹生病死亡。四株枯草芽孢桿菌變異菌株：枯草芽孢桿菌變異菌株1^#、2^#、3^#和4^#既能分解轉化池水中的氨氮和硝基氮，又能分解池水中的殘存飼料和水產品排泄物所含的大分子有機化合物，適于用來制備復合型活菌生物凈水劑。為實現該凈水劑的工業化生產，需有獲得大量上述變異菌株菌體的方法。背景技術中有一種液體發酵法，可用來批量培養上述變異菌株：先用蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、葡萄糖和無機鹽等配制液體培養基；然后把上述四株變異菌株的細菌種子分別接入四個盛有上述液體培養基的發酵罐中；最后通過液體發酵，批量培養，獲得大量活菌體：枯草芽孢桿菌變異菌株1^#、2^#、3^#和4^#。1噸的發酵罐可裝700Kg的液體培養基，能得到7～8Kg的濕菌體，以每克濕菌體含活菌數100億個計，獲得的活菌數僅為700000億～800000億個。背景技術雖能批量培養活菌體，但有成本高昂、獲得的活菌數少和不易推廣使用的缺點。

本發明的目的是提出一種成本低廉、獲得的活菌數多和易于推廣使用的枯草芽孢桿菌變異菌株的批量培養方法。

該目的通過采用以下技術方案得以實現：一種枯草芽孢桿菌變異菌株的培養方法，其特征在于，操作步驟：

第1步??配制液體培養基，為四個1噸的發酵罐配制液體培養基，向每罐投入原料700Kg，該原料配方為黃豆并粉7～56Kg，玉米粉14～49Kg，麩皮3.5～35Kg，工業級硫酸銨2.8～4.9Kg，工業級氯化銨0.7～2.1Kg，水553～672Kg，混和攪拌均勻，制成相同的液體培養基四罐；

第2步??滅菌，在壓力為1.1～1.4Kg/cm²的的條件下，對罐內的液體培養基進行高壓滅菌處理，處理時間為30～40分鐘；

第3步??菌體培養，待罐內的液體培養基冷卻到30～50℃時，按5～10∶95～90的重量比率把預先經二級培養成的處于對數生長期的枯草芽孢桿菌變異菌株1^#、2^#、3^#和4^#的細菌種子分別接入上述的四個發酵罐，在罐壓、通風量、轉速和罐溫分別為0.4～0.6Kg/cm²、0.5～1.0∶0.6～1.2V/V、200～300rpm和20～50℃的條件下，連續培養20～72小時；

第4步??獲得活菌，經上步發酵的液體培養液，用轉速為3000～10000rpm的離心機離心20～30分鐘，從四個發酵罐分別得到60～70Kg的枯草芽孢桿菌變異菌株1^#、2^#、3^#和4^#的濕菌體，以每克濕菌體含活菌20億～50億個計，從每罐獲得的活菌數為1200000億～3500000億個。

與背景技術相比，本發明具有以下優點：

1.成本低廉。因為原料主要是農副產品的下腳或飼料，所用無機鹽為工業級，量少價廉。

2.獲得的活菌數多。約是背景技術的1.5～5倍。

3.便于推廣使用。

本發明特別適于用來批量培養枯草芽孢桿菌變異菌株1^#、2^#、3^#和4^#菌體，為工業化生產復合型活菌生物凈水劑提供活菌原料，是一項能促進水產養殖的、能產生巨大經濟效益的和便于推廣使用的新技術。