[發(fā)明專利]一種多肽——蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域－23.43和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 01112610.8
• 申請日: 2001-04-18
• 公開（公告）號: CN1381469A
• 公開（公告）日: 2002-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

蛋白激酶C(PKC)代表了一群在結(jié)構(gòu)、大小、作用機(jī)理等方面相似的蛋白。它們可以迅速、可逆地調(diào)整蛋白的生物作用。一些PKC的同工酶包含這樣一個結(jié)構(gòu)域，稱之為C2結(jié)構(gòu)域。C2位于兩個C1結(jié)構(gòu)域(主要結(jié)合佛波醇酯和二酰甘油)和催化域之間，由約116個氨基酸殘基組成。C2結(jié)構(gòu)域被認(rèn)為與結(jié)合Ca²⁺和結(jié)合磷脂有關(guān)。(Eur.J.Biochem.208：547-557(1992).)

C2特征結(jié)構(gòu)位于結(jié)構(gòu)域的一個保守部分，即β2和β3的聯(lián)結(jié)環(huán)上。其共同序列為：(ACG)-X(2)-L-X(2，3)-D-X(1，2)-(NGSTLIF)-(GTMR)-X-(STAP)-D-(PA)-(FY)，這個結(jié)構(gòu)只能用來探測經(jīng)典的C2結(jié)構(gòu)域，主要存在于PKC同工酶α、β和γ，突觸結(jié)合蛋白，Rab親合蛋白，unc-13，RSP5/NEDD-4，穿孔素和F37A4.7等。

C2的空間結(jié)構(gòu)為8線形成的類似于希臘字母β的多層結(jié)構(gòu)。(Cell，Vol.80，929-938，1995)PI3激酶和PKC同工酶的少數(shù)分支無此結(jié)構(gòu)。

PKC參與一些由胞外刺激如激素、神經(jīng)傳遞素、生長因子等觸發(fā)的信號傳遞系統(tǒng)。

蛋白激酶C2結(jié)構(gòu)域是生物體的重要組成，本發(fā)明的蛋白具有上述保守序列及相同功能，被認(rèn)為是一種蛋白激酶C2結(jié)構(gòu)域，與結(jié)合Ca²⁺和磷脂有關(guān)。若表達(dá)異常，會導(dǎo)致蛋白激酶功能異常，破壞生物體的正常生理功能，從而引起一系列疾病。

由于如上所述蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43蛋白在機(jī)體內(nèi)重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中16-657位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1693位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。

本發(fā)明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發(fā)明的多肽。本發(fā)明還涉及用該方法獲得的化合物。

本發(fā)明還涉及一種體外檢測與蛋白激酶2結(jié)構(gòu)域-23.43蛋白異常表達(dá)相關(guān)的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本發(fā)明多肽的量或生物活性。