[發(fā)明專利]牛催乳素基因組序列、含其基因的載體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 01112604.3
• 申請(qǐng)日: 2001-04-17
• 公開（公告）號(hào): CN1329139A
• 公開（公告）日: 2002-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃淑幀;曹新;曾溢滔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海滔滔轉(zhuǎn)基因工程股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12N15/63
• 代理公司: 上海醫(yī)科大學(xué)專利事務(wù)所
• 代理人: 吳桂琴,石昭

本發(fā)明屬基因工程領(lǐng)域和轉(zhuǎn)基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種新的牛催乳素基因核苷酸序列、利用牛催乳素基因組DNA和cDNA構(gòu)建的載體、由這些載體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞以及載體和細(xì)胞的應(yīng)用。

牛的催乳素(bovine?Prolactin；bPRL)是牛腺垂體分泌的單鏈多肽類激素。1928年Stricker等用牛腺垂體提取物導(dǎo)致兔泌乳，提示腺垂體中含有催乳的活性物質(zhì)。(Stricker?P，Gruter?R1928.Action?du?lobe?anterieur?de?l＇hypophysesur?la?monteelaiteuse.C?R?soc?Biol?99：1978-1980)Riddle等根據(jù)該活性物質(zhì)的特性命名為催乳素(prolactin，PRL)。(Riddle?O，Bates?RW，andDykshorn?SW.1933.The?preparation，identification?and?assay?ofprolactin—a?hormone?of?anterior?pituitary.Am?J?physiol105：191-216)。隨后在魚類、兩棲類和哺乳類(鼠、貓、兔、羊、牛、人)動(dòng)物的腺垂體組織中均分離、純化和鑒定了相應(yīng)的催乳素。

PRL生物學(xué)功能非常廣泛，以往的文獻(xiàn)報(bào)告(Nicoll?CS，Bern?H.1972.On?the?actions?of?PRL?among?the?vertebrates：is?there?acommon?denominator？In：Wolstenholme?G，Knight?J，editors.Lactogenic?Hormone.London：Churchill?Livingstone，299-327)，在各種脊椎動(dòng)物中PRL的生物學(xué)作用多達(dá)85種，這比其它垂體激素生物學(xué)作用的總和還多。近期文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)(Bole-Feysit?C，Goffin?V，Edery?Met?al.，1998.Prolactin?and?its?receptor：actions，signaltransduction?pathways?and?phenotypes?observed?in?PRL?receptorknockout?mice.Endocr?Rev?19：225-268)PRL的生物學(xué)作用至少在300種以上，其中主要集中在：(1)乳腺相關(guān)的功能：PRL對(duì)于哺乳動(dòng)物的乳腺發(fā)育和乳汁生成、發(fā)動(dòng)和維持泌乳是必不可少的激素；(2)生殖相關(guān)的功能；(3)免疫相關(guān)的功能；(4)生長(zhǎng)代謝及其它功能等。

牛PRL相對(duì)分子質(zhì)量為23000-24000，初始的翻譯產(chǎn)物為229個(gè)氨基酸的多肽，成熟的多肽含有199個(gè)氨基酸。在PRL分子的氨基端、羧基端以及中間區(qū)有3對(duì)半胱氨酸之間的二硫鍵，使PRL分子形成3個(gè)環(huán)。垂體中PRL主要相對(duì)分子質(zhì)量為23000，但在大多數(shù)哺乳動(dòng)物中包括牛的體內(nèi)存在一些與其本源PRL(native?PRL)分子大小、結(jié)構(gòu)不同的異型，這些異型PRL的結(jié)構(gòu)和生理學(xué)功能有待于更深入的研究。

牛PRL基因位于22號(hào)染色體，長(zhǎng)度超過10Kb。與其它物種基因結(jié)構(gòu)相似，編碼區(qū)具有5個(gè)外顯子、4個(gè)內(nèi)含子，第1、部分2外顯子編碼信號(hào)肽，部分2，第3、4、5外顯子編碼成熟的PRL的多肽分子。其內(nèi)含子的長(zhǎng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于外顯子，成熟的mRNA全長(zhǎng)907bp。

在本發(fā)明之前，牛PRL基因cDNA序列已經(jīng)公布(Genebank)，全長(zhǎng)907bp，但牛PRL基因全長(zhǎng)未見報(bào)告，用牛PRL基因(GenomicDNA，cDNA)構(gòu)建載體、特別是乳腺特異表達(dá)載體未見報(bào)告，用牛PRL基因(Genomic?DNA，cDNA)載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞以及建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型未見報(bào)告。

本發(fā)明的目的在于提供全長(zhǎng)牛催乳素基因組DNA，并提供利用牛PRL基因構(gòu)建的載體，由載體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，以及載體、細(xì)胞的應(yīng)用。