[發明專利]牛催乳素基因組序列、含其基因的載體及其應用

有效

• 申請號: 01112604.3
• 申請日: 2001-04-17
• 公開（公告）號: CN1329139A
• 公開（公告）日: 2002-01-02
• 發明（設計）人: 黃淑幀;曹新;曾溢滔
• 申請（專利權）人: 上海滔滔轉基因工程股份有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63
• 代理公司: 上海醫科大學專利事務所
• 代理人: 吳桂琴,石昭

本發明屬基因工程領域和轉基因工程領域，具體涉及一種新的牛催乳素基因核苷酸序列、利用牛催乳素基因組DNA和cDNA構建的載體、由這些載體轉染的細胞以及載體和細胞的應用。

牛的催乳素(bovine?Prolactin；bPRL)是牛腺垂體分泌的單鏈多肽類激素。1928年Stricker等用牛腺垂體提取物導致兔泌乳，提示腺垂體中含有催乳的活性物質。(Stricker?P，Gruter?R1928.Action?du?lobe?anterieur?de?l＇hypophysesur?la?monteelaiteuse.C?R?soc?Biol?99：1978-1980)Riddle等根據該活性物質的特性命名為催乳素(prolactin，PRL)。(Riddle?O，Bates?RW，andDykshorn?SW.1933.The?preparation，identification?and?assay?ofprolactin—a?hormone?of?anterior?pituitary.Am?J?physiol105：191-216)。隨后在魚類、兩棲類和哺乳類(鼠、貓、兔、羊、牛、人)動物的腺垂體組織中均分離、純化和鑒定了相應的催乳素。

PRL生物學功能非常廣泛，以往的文獻報告(Nicoll?CS，Bern?H.1972.On?the?actions?of?PRL?among?the?vertebrates：is?there?acommon?denominator？In：Wolstenholme?G，Knight?J，editors.Lactogenic?Hormone.London：Churchill?Livingstone，299-327)，在各種脊椎動物中PRL的生物學作用多達85種，這比其它垂體激素生物學作用的總和還多。近期文獻報導(Bole-Feysit?C，Goffin?V，Edery?Met?al.，1998.Prolactin?and?its?receptor：actions，signaltransduction?pathways?and?phenotypes?observed?in?PRL?receptorknockout?mice.Endocr?Rev?19：225-268)PRL的生物學作用至少在300種以上，其中主要集中在：(1)乳腺相關的功能：PRL對于哺乳動物的乳腺發育和乳汁生成、發動和維持泌乳是必不可少的激素；(2)生殖相關的功能；(3)免疫相關的功能；(4)生長代謝及其它功能等。

牛PRL相對分子質量為23000-24000，初始的翻譯產物為229個氨基酸的多肽，成熟的多肽含有199個氨基酸。在PRL分子的氨基端、羧基端以及中間區有3對半胱氨酸之間的二硫鍵，使PRL分子形成3個環。垂體中PRL主要相對分子質量為23000，但在大多數哺乳動物中包括牛的體內存在一些與其本源PRL(native?PRL)分子大小、結構不同的異型，這些異型PRL的結構和生理學功能有待于更深入的研究。

牛PRL基因位于22號染色體，長度超過10Kb。與其它物種基因結構相似，編碼區具有5個外顯子、4個內含子，第1、部分2外顯子編碼信號肽，部分2，第3、4、5外顯子編碼成熟的PRL的多肽分子。其內含子的長度遠遠大于外顯子，成熟的mRNA全長907bp。

在本發明之前，牛PRL基因cDNA序列已經公布(Genebank)，全長907bp，但牛PRL基因全長未見報告，用牛PRL基因(GenomicDNA，cDNA)構建載體、特別是乳腺特異表達載體未見報告，用牛PRL基因(Genomic?DNA，cDNA)載體轉染細胞以及建立轉基因動物模型未見報告。

本發明的目的在于提供全長牛催乳素基因組DNA，并提供利用牛PRL基因構建的載體，由載體轉染的細胞，以及載體、細胞的應用。