[發明專利]一種枸杞同源四倍體的育種方法

無效

• 申請號: 01111148.8
• 申請日: 2001-04-06
• 公開（公告）號: CN1313027A
• 公開（公告）日: 2001-09-19
• 發明（設計）人: 李健;王錦秀
• 申請（專利權）人: 寧夏林業研究所(有限公司)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 寧夏專利服務中心
• 代理人: 王其樞

本發明涉及一種枸杞多倍體的育種方法，尤其是涉及一種枸杞同源四倍體的育種方法。

在現有技術中，枸杞同源四倍體通常是利用誘變劑如秋水仙素處理枸杞種子或枸杞實生苗生長點或枸杞莖尖使其染色體加倍后培植得到的，這種方法的缺點是：(1)誘變頻率低，如用誘變劑處理枸杞種子，其胚根細胞染色體加倍，但其成苗后莖尖經鏡檢無加倍細胞，處理枸杞實生苗生長點誘變頻率僅為1/130-200；(2)育種周期長，以處理枸杞實生苗生長點誘變多倍體的方法為例，從播種、誘變、觀察、鏡檢到確定為枸杞同源多倍體需兩年以上時間；(3)優選率低，由于事先不知誘變材料本身的遺傳性狀，因而優選率低；(4)由于利用上述方法誘導枸杞同源四倍體出現嵌合體的頻率高，因而很難獲得純同源四倍體株系。

本發明的目的是克服上述現有技術的缺陷，提供一種誘變頻率高，育種周期短，優選率高，實用效果好且能獲得純枸杞同源四倍體的育種方法。

本發明的技術方案為：

一種枸杞同源四倍體的育種方法，其特征在于，包括以下過程：

a．優良枸杞無性系愈傷組織的誘導：將優良無性系枸杞葉片消毒后，切成塊，接種在含6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和吲哚-3-乙酸(IAA)的MS培養基中培養；

b．枸杞同源四倍體的誘導：將上述培養好的愈傷組織用秋水仙素進行染色體加倍處理；

c．枸杞同源四倍體植株培養：將上述處理后的愈傷組織接種在含6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和吲哚-3-乙酸(IAA)的培養基中培養，成苗后，鏡檢，確認為四倍體的植株擴繁，上述a過程和c過程的培養條件為：培養溫度26-30℃，光照1800-2200勒克斯(LX)下，每天照射10-12h，培養時間為25-30天。

上述a過程中消毒程序為，先用70％酒精浸泡0.5-1分鐘，再用0.1％氯化汞(升汞Hgcl₂)浸泡8-10分鐘，最后用無菌水沖洗。

上述b過程的誘導程序為：將處理過的愈傷組織切割成小塊，放入培養皿中，該小塊的上部和下部均鋪設用0.2％的秋水仙素溶液浸透的脫脂棉，然后在無菌、黑暗條件下處理48h。

上述a和c過程中6-芐基氨基嘌呤(6-BA)用量為0.5-1.5mg/l，吲哚-3-乙酸(IAA)的用量為0.5-2.0mg/l。

上述a過程中6-芐基氨基嘌呤(6-BA)用量為1mg/l，吲哚-3-乙酸(IAA)的用量為0.5mg/l。

上述c過程中6-芐基氨基嘌呤(6-BA)用量為0.5mg/l，吲哚-3-乙酸(IAA)的用量為1mg/l。

上述MS培養基用于一般組織培養。

本發明的枸杞同源四倍體的育種方法，由于在進行染色體誘變加倍前，首先進行優質愈傷組織的培養，從而提高了誘變率，試驗證明愈傷組織類型不同，其誘變頻率存在極顯著差異，如白色疏松型愈傷組織誘變頻率僅為2.3％，而淺綠色、質地堅硬、表面無綠色芽點的愈傷組織誘變率高達97.5％；本技術手段所提供的同源四倍體的誘變條件，使得愈傷組織經秋水仙素處理后受損程度降至最低，試驗證明，愈傷小塊在同樣濃度，同樣處理時間條件下，若浸泡在秋水仙素藥液中，處理后分化芽極少，有的整塊無分化能力，而采用該技術可使誘變苗木分化率提高63.7％；同時，由于將鏡檢與同源四倍體無性系的建立同步進行，因而可提供純種的同源四倍體，縮短育種年限，如在無籽枸杞新品種99-3的選育中，作為親本之一的同源四倍體98-2是98年2月確定為純同源四倍體，3月份生根移栽，當年7月中旬即開花、結果。

實施例：

采用優良枸杞無性系的葉片用自來水沖洗3-4h，消毒：70％酒精浸泡1min→0.1％升汞(Hgcl₂)浸泡10min→用無菌水沖洗3-5次，將葉片縱向切開，再橫斷成小塊，接種在MS+6-BAlmgL^-1+IAA0.5mgL^-1培養基中，放在培養室中培養。培養條件為：溫度28℃，光照2000LX下，每天光照12h，培養30天，即可形成大量愈傷組織。