[發(fā)明專利]酯酶同工酶診斷試劑盒的制備

無效

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• 申請日: 2001-04-20
• 公開（公告）號: CN1381727A
• 公開（公告）日: 2002-11-27
• 發(fā)明（設計）人: 侯金鳳;舍英;閻美容;陳必珍
• 申請（專利權）人: 呼和浩特同日試劑有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種酯酶同工酶診斷試劑盒的制備，屬于酶學領域。

近年來，酶學在臨床診斷與治療中的應用發(fā)展非常迅速，現(xiàn)已分別發(fā)展為醫(yī)學中的兩個新領域，即診斷酶學和治療酶學。目前已有上百種酶試驗可用于臨床診斷。臨床酶學的這一發(fā)展，部分是由于測定技術的發(fā)展，使許多酶的測定已日益精確和簡便，可用于常規(guī)測定。部分是由于認識到某些疾病發(fā)展過程中酶活力必然發(fā)生改變這一客觀事實，特別是在疾病的早期，用X光片、CT還未能發(fā)現(xiàn)病灶時，而體內的酶活性已開始發(fā)生變化。如果能定期查體，可做到對疾病的早期發(fā)現(xiàn)。值得一提的是，目前臨床上診斷酶學的應用多數(shù)是對酶的總活性的測定，并且市場上已有相應試劑盒銷售，其缺點是缺乏器官特異性。目前有關酶活性測定的試劑盒約有20～30種，同工酶檢測試劑盒約有3～5種，但多數(shù)用的是化學抑制法或免疫抑制法。而同工酶是指酶蛋白結構不同而具有相同的催化特性的一類酶，不同的同工酶來自不同的組織和細胞。當某一組織或器官發(fā)生病變時，由于組織受損或細胞膜通透性的變化，引起細胞內酶大量釋入血液而引起血清酶活性的改變。通過同工酶的檢測可確定患病部位，從而提高酶學診斷的特異性和敏感性，還可判斷預后。目前由于自行配制酶顯示液，因所用試劑品種繁多，規(guī)格不一，致使酶顯示結果不穩(wěn)定，結果判定不統(tǒng)一，且同工酶檢測操作較繁瑣，費時等等，特別是大型生化分析儀的應用，使臨床生化檢測的操作更簡便，省時、省力，但其是對總酶活性的測定，缺乏組織特異性，相比較，同工酶的檢測使病變早期定性和定位就精確的多了。

本發(fā)明的目的在于提供一種質量優(yōu)良、性能穩(wěn)定、重復性能好，同時大大簡化了檢測的操作過程且使用該試劑盒可使同工酶的檢測操作規(guī)范化，從而使酶活性的檢測及質量控制達到統(tǒng)一標準的酯酶同工酶診斷試劑盒的制備。

本發(fā)明的目的由如下技術方案實施：

做醋酸纖維素薄膜電泳時，其包括有：(1)、配制濃度為0.03mol/L-0.1mol/L電極液，PH為7.5-9.0；(2)、配制濃度為0.05mol/L-0.2mol/L泡電泳膜緩沖液，分裝安瓿A；(3)、將冰乙酸做為固定液分裝安瓿G，用時加水稀釋；(4)、顯色液的配制：(a)、將底物分裝安瓿B；(b)、溶劑分裝安瓿C；(c)、將濃度為0.05～0.25mol/L緩沖液分裝安瓿D；(d)、將重氮鹽染料分裝安瓿E；(e)、將瓊脂糖分裝安瓿F；

其中將所述安瓿B內的底物、安瓿E內的重氮鹽染料、安瓿F內的瓊脂糖按重量百分比，其所占比例分別是14.4％-83.3％，12.8％-85.4％，1.5％-28.6％；按上述比例，用時先將安瓿B內的底物、10～30微升安瓿C內的溶劑混合，然后將安瓿D內1～2.5ml濃度為0.05～0.25mol/L的緩沖液和安瓿E內的重氮鹽染料混合溶解，將安瓿F內的瓊脂糖加水加熱溶解，然后將安瓿B內的底物和安瓿C內的溶劑的混合液，安瓿D內的緩沖液和安瓿E內的重氮鹽染料的混合液、安瓿F內的瓊脂糖溶解后混合，即為顯色液。

做瓊脂糖凝膠電泳時，其包括有：(1)、配制濃度為0.03mol/L-0.1mol/L電極液，PH為7.5-9.0；(2)、將冰乙酸做為固定液分裝安瓿G，用時加水稀釋；(3)、配制瓊脂凝膠：

將瓊脂糖或瓊脂、泡電泳膜緩沖液、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮分裝安瓿A，其中瓊脂糖或瓊脂、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮(按重量百分比)其比例分別為19.2％-38.3％，43.5％-77.0％，3.8％-23.0％，泡電泳膜緩沖液是80～120ml的濃度為0.05mol/L-0.2mol/L緩沖液，將瓊脂糖或瓊脂、泡電泳膜緩沖液、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A；(4)、顯色液的配制：

(a)、將底物分裝安瓿B；

(b)、溶劑分裝安瓿C；

(c)、將濃度為0.05～0.25mol/L緩沖液分裝安瓿D，

(d)、將重氮鹽染料分裝安瓿E；

其中將所述安瓿B內的底物、安瓿E內的重氮鹽染料，按重量百分比，所占比例分別是12.5％-85.7％，14.3％-87.5％；用時將安瓿B內的底物加入10～30微升安瓿C內的溶劑，安瓿E內的重氮鹽染料加入1～2.5ml安瓿D內濃度為0.05～0.25mol/L的緩沖液，再將安瓿B和安瓿C內容物的混合液和安瓿E與安瓿D內容物的混合液混合，即為顯色液。

所述瓊脂凝膠是將瓊脂糖或瓊脂、濃度為0.05mol/L-0.2mol/L泡電泳膜緩沖液分裝安瓿A，其中所述瓊脂糖或瓊脂0.5g～1g，加入80～120ml的緩沖液，加熱溶解，趁熱分裝。