[發(fā)明專利]人結(jié)締組織生長因子及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 01107226.1
• 申請日: 2001-02-27
• 公開（公告）號: CN1314415A
• 公開（公告）日: 2001-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李琦涵;趙紅玲;王炯;王麗春;趙樹棟;孫明;和紹清;董承紅;胡方;劉龍丁;董少忠;王晶晶;馬紹輝
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所
• 主分類號: C07K14/475
• 分類號: C07K14/475;C12N15/12;C12N15/63;C12Q1/00
• 代理公司: 云南協(xié)立專利事務(wù)所
• 代理人: 旃習(xí)涵,吳平

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中國人種的結(jié)締組織生長因子。

九十年代以來，在對細(xì)胞分子生物學(xué)全面了解的基礎(chǔ)上，一類新的基因反應(yīng)--“即刻早期基因反應(yīng)”受到普遍關(guān)注。這是細(xì)胞受到外界信號刺激后立即產(chǎn)生的一種基因反應(yīng)，它由多種刺激信號途徑所激發(fā)，對各種信號刺激作出自身的以及相應(yīng)組織或其它細(xì)胞的整體反應(yīng)，以確保整個組織或機體的平衡。在研究各種生長因子對于組織再生和修復(fù)的作用中，發(fā)現(xiàn)了由內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的結(jié)締組織生長因子，這種新的生長因子可能在人類組織的正常發(fā)育、生長和修復(fù)過程中發(fā)揮重要作用。

科學(xué)試驗表明，在細(xì)胞即刻早期反應(yīng)中，有一部分反應(yīng)產(chǎn)物就是一些具有較強生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，當(dāng)其在特定刺激下產(chǎn)生后，它們能通過其它細(xì)胞或組織，發(fā)揮其特定的生物學(xué)效應(yīng)，以保證機體的代償平衡。

人結(jié)締組織生長因子(Connective?Tissue?Growth?Factor-縮寫CTGF)就是這樣的即刻早期基因產(chǎn)物。在正常情況下，血中和體液中無可檢測到的CTGF，當(dāng)在創(chuàng)傷刺激或某些細(xì)胞因子的信號刺激下，它以即刻早期基因產(chǎn)物形式被迅速合成分泌并作用于結(jié)締組織中的細(xì)胞基質(zhì)、成纖維細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞等。同時對其它炎性細(xì)胞表現(xiàn)一種趨化作用，通過這一系列的生物學(xué)效應(yīng)，它能促進(jìn)創(chuàng)傷的修復(fù)，調(diào)節(jié)創(chuàng)傷部位纖維組織、血管內(nèi)皮細(xì)胞等的生長。CTGF作為一個具有促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)的生物活性因子，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。

但是，迄今為止，CTGF作為一種具有應(yīng)用價值的細(xì)胞因子，僅在理論上得到認(rèn)識。其純化技術(shù)、活性檢測系統(tǒng)均未完全建立，有待進(jìn)一步深入研究。

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，從克隆中國人種的CTGF基因入手，建立中國人種的CTGF基因克隆，并明確其系列結(jié)構(gòu)，從而建立CTGF的表達(dá)體系，完善產(chǎn)物純化方法及產(chǎn)物活性檢測方法。

本發(fā)明公開的人結(jié)締組織生長因子(HCTGF)具有以下特征：

1、序列特征

本發(fā)明hCTGF的cDNA位序列含有一個1050個核苷酸的開放閱讀框，起始位點位于第120位，TGA終止位點位于第1179位，編碼350個氨基酸。在3’端非編碼區(qū)與國外已發(fā)表的序列有明顯的差異性，這個差異的意義目前尚不能肯定，僅就一般原則而言，可能與CTGF表達(dá)調(diào)控的不同有一定關(guān)系(從這個角度亦證明本發(fā)明所分離的這個基因的獨立性)。同時，對數(shù)個基因片段中的有關(guān)位置進(jìn)行無義點突變修飾后，使該基因增加了一個KpnⅠ位點，一個xhoⅠ位點(酶切位點的引入并不影響CTGF的氨基酸編碼系列)，該二位點亦可作為該基因的特征之一。本發(fā)明中包括5’和3’非翻譯區(qū)的多核苷酸；含啟動子的5’調(diào)控區(qū)。CTGF開放閱讀框編碼的多肽含39個半胱氨酸殘基，表明這是一種具有許多分子內(nèi)二硫鍵的蛋白質(zhì)。該肽的氨基端含一段疏水信號序列，提示這是一種分泌蛋白，而且該肽在氨基酸系列的28位和225位天冬酰胺基上有兩個N-連接的糖基化位點。CTGF多肽的特征是以單體形式存在，分子量為36～38KD。

2、來源：克隆：中國人原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞mRNA

3、序列描述：(見后頁)