[發明專利]一種用醋酸纖維絲制備固定化染料親和色譜介質的方法

無效

• 申請號: 01106348.3
• 申請日: 2001-03-23
• 公開（公告）號: CN1376920A
• 公開（公告）日: 2002-10-30
• 發明（設計）人: 李京華;商振華;魏桂林;于億年;劉學良
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/48
• 分類號: G01N30/48
• 代理公司: 沈陽科苑專利代理有限責任公司
• 代理人: 許宗富,周秀梅

本發明涉及親和色譜技術，具體地說是一種用醋酸纖維絲制備固定化染料親和色譜介質的方法。

親和色譜是進行蛋白質及多肽、糖類、抗原抗體、生化藥物、基因工程產品純化分離的最有效的手段，尤其在基因工程產品的生產中，分離純化的費用常常占生產成本中的主要部分。采用親和色譜，可以大大降低基因工程產品的費用，提高產品的純度和收率。固定化活性染料親和色譜是一種帶通用型配基的親和色譜，它利用活性染料上帶有與煙酰胺腺嘌呤二核苷酸類似的基團，與激酶、水解酶、聚合酶等核苷酸依賴性的蛋白質結合，進行親和分離純化；也可以用于不具有核苷酸結合功能的各種蛋白質的純化。赫曼森等編輯的《固定化親和配體技術》，研究院合作出版社，加利福尼亞，1992(Greg?T.Hermanson?et?al.，《ImmobilizedAffinity?Ligand?Techniques》Academic?Press，Inc.California.1992)一書中，報道了在瓊脂糖上偶聯活性染料Cibacron?Blue的方法(第173頁)；采用瓊脂糖固定化Cibacron?Blue介質，直接從人血漿中分離純化出人血清白蛋白的方法(第341頁)。作為固定化活性染料親和色譜介質，目前主要有瓊脂糖，三羥甲基甲基丙烯酰胺等。根據西格馬《生化試劑與一般試劑》，2000-2001(Sigma，“Biochemicalsand?Reagents”，2000-2001)報道，采用Pharmacia公司生產的瓊脂糖凝膠SepharoseCL-6B為基質材料的固定化Cibacron?Blue親和色譜介質，對人血清白蛋白的親和吸附量為90-125毫克/克介質。但是在實際應用中，Travis從人血漿中直接親和純化人血清白蛋白的能力為32.5毫克/克介質。上述這些介質或者價格昂貴，或者負載量低。

本發明的目的是提供一種價格低、生物相容性好、可反復利用的用醋酸纖維絲制備固定化染料親和色譜介質的方法。

為了實現上述目的，本發明的技術方案是：以醋酸纖維絲為基材，經堿處理，偶聯活性染料，再經氯化鈉和碳酸鈉處理，其加入量按如下重量比例：醋酸纖維絲∶堿溶液∶偶聯活性染料∶氯化鈉∶碳酸鈉＝0.1～10∶10～50∶0.01～2∶0.5～6∶0.05～0.8；具體步驟為：1)取醋酸纖維絲，加入0.1～1M氫氧化鈉，室溫處理10～15小時，用蒸餾水洗滌至pH中性；2)加入蒸餾水，于50～70℃溫度下緩慢加入濃度為2～20毫克/毫升偶聯活性染料水溶液，反應0.5～2小時，再加入氯化鈉，在同樣溫度下反應0.5～2小時；3)升溫至80～90℃，加入碳酸鈉，在同樣溫度下反應1.5～2.5小時；4)用蒸餾水洗滌至上清無染料顏色；

所述醋酸纖維絲基材是指醋酸纖維絲本身、醋酸纖維絲的填充物、醋酸纖維絲經物理加工制成的濾棒、濾餅、濾紙或濾膜；

所述偶聯染料為蘭色活性染料：Cibacron?Blue?F3GA，Reactive?Blue?2，ReactiveBlue?4，Reactive?Blue?72；紅色活性染料：Reactive?Red?120；褐色活性染料：ReactiveBrown?10；綠色活性染料：Reactive?Green?5，Reactive?Green?19；黃色活性染料Reactive?Yellow?3，Reactive?Yellow?86。

本發明工作原理如下：

染料Cibacron?Blue?F3GA和Reactive?Red?120等活性染料均含有活性三嗪環，環上有一或二個氯原子，通過活性三嗪環與羥基反應形成三嗪酯，可以將染料與含羥基的醋酸纖維絲共價交聯起來；

本發明所述醋酸纖維絲濾棒：醋酸纖維素制成，成型時加固化劑以使粘附，并提高吸附力，易潤濕于水溶液中。長100毫米，直徑7.7毫米，重0.615克，吸阻2100-2300帕。橫斷剪開，纖維不松散，無毛刺，相互纏繞，但經5M?NaOH浸泡3天，產生大量小纖維，松散。

本發明具有如下優點：

1.生物相容性好。本發明采用作香煙過濾嘴的醋酸纖維絲，經堿處理，偶聯活性染料，再經氯化鈉和碳酸鈉處理，可得到醋酸纖維絲固定化蘭色染料、褐色染料、綠色染料、紅色染料、黃色染料親和色譜介質；其醋酸纖維絲表面積大，具有大量可供反應的羥基。