[發明專利]一種多肽——葡萄糖基轉移酶蛋白－25.52和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105934.6
• 申請日: 2001-04-10
• 公開（公告）號: CN1380335A
• 公開（公告）日: 2002-11-20
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

內質網酶尿苷二磷酸-葡萄糖蛋白即葡萄糖基轉移酶具有催化尿苷二磷酸-葡萄糖的葡萄糖殘基的特性；如果攜帶一個N-連接的人GlcNAc寡聚糖，則該酶就能識別不完全折疊的葡萄糖蛋白。利用已知的多肽序列，鼠肝臟的完整的cDNA已經被分離得到并在宿主細胞內得到表達。這個cDNA揭示了一個開放閱讀框，該開放閱讀框編碼一個由1527個殘基組成的蛋白，其中含有一個18個氨基酸的信號肽。這個蛋白具有內質網蛋白的一個特異序列，即一個C-末端的四肽。經提純的葡萄糖基轉移酶的重組體表現出與鼠肝臟提純得到的酶相似的優先識別未折疊的含有N-連接的人GlcNAc多肽的特性。已經得到的用于遺傳工程的能夠產生人GlcNAc寡聚糖核心的啤酒酵母菌株能夠分泌一種磷酸酶，這種磷酸酶被用于葡萄糖基轉移酶的受體糖蛋白，結果發現，該磷酸酶是一種比先前使用的大豆凝集素及甲狀腺球蛋白更好的葡萄糖基轉移酶的底物。葡萄糖基轉移酶的一個分解蛋白的框架被發現具有保持酶活性并使其定位于蛋白C-末端37kDa的功能[Tessier，DC等Genetics?Group，Biotechology?Research?Institute，NationalResearch?Council?of?Canada，Montreal，Quebec?H4P?2R2，Canada]。

本發明的蛋白與上述的葡萄糖基轉移酶蛋白在蛋白水平上有49％的同一性和64％的相似性，且具有該蛋白的保守的序列片段，因而被認為是一種新的蛋白，命名為葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52。其突變或表達異常將導致相關蛋白的表達異常，進而引發各種相關的疾病。

由于如上所述葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中85-783位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1802位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。

本發明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制葡萄糖基轉移酶蛋白-25.52蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發明的多肽。本發明還涉及用該方法獲得的化合物。