[發(fā)明專(zhuān)利]一種多肽——多聚核苷聚合酶－80.96和編碼這種多肽的多核苷酸

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 01105931.1
• 申請(qǐng)日: 2001-04-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1380397A
• 公開(kāi)（公告）日: 2002-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海博德基因開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N9/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N9/00;C12N15/52;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/68;A61K38/43
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽——多聚核苷聚合酶-80.96，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明公開(kāi)了一種新的多肽——多聚核苷聚合酶-80.96，編碼此多肽的多核苷酸和經(jīng)DNA重組技術(shù)產(chǎn)生這種多肽的方法。本發(fā)明還公開(kāi)了此多肽用于診治多種疾病的方法，如糖尿病、甲亢、心律失常、腫瘤、各種感染等。本發(fā)明還公開(kāi)了抗此多肽的拮抗劑及其診治作用。本發(fā)明還公開(kāi)了編碼這種新的多聚核苷聚合酶-80.96的多核苷酸的用途。

RNA聚合酶是復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄機(jī)構(gòu)的核心部分，與RNA基因的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制有密切關(guān)系。原核生物中各類(lèi)RNA都是由一種RNA聚合酶催化合成的，真核生物則不同，他們的轉(zhuǎn)錄性能已經(jīng)變得更加專(zhuān)門(mén)化了。真核生物的多聚核苷聚合酶是一種不依賴(lài)于DNA的RNA聚合酶，負(fù)責(zé)合成RNA的聚腺苷酸的尾部。。

在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中，所有真核生物的信使RNAs上會(huì)出現(xiàn)聚腺苷酸的尾部。多聚核苷聚合酶能催化各種多聚核糖核酸的3??末端聚合A堿基的反應(yīng)，能以單鏈RNA作為引物。(Christofori?and?Keller，1988；Takakgaki?et?al.，1989；Gilmartin?andNevins，1989).Poly(A)尾的合成由多聚核苷聚合酶以及裂解和聚腺苷酸化因子(CPF)共同作用所形成。CPF在RNA的聚腺苷酸化位點(diǎn)AAUAAA，此位點(diǎn)是位于RNA的10-30核苷酸的聚腺苷酸化位點(diǎn)。從小牛胸腺中提取純化的多聚核苷聚合酶是均一性的57-60kDa的蛋白。此酶的單一行式不能識(shí)別聚腺苷酸化位點(diǎn)AAUAAA，實(shí)際上它和RNA底物的關(guān)系并不密切。Mg²⁺到反應(yīng)中，可以非特異性提高酶對(duì)RNA引物的親和性，有效的提高位點(diǎn)AAUAAA和CPF的聚腺苷酸化。(Tsiapalis?et?al.，1975；Christofori?and?Keller，1988；Takakgaki?et?al.，1988；Wahle，1991a)

本發(fā)明的人的該酶與多聚核苷聚合酶在蛋白水平上有的62％相同性和74％的相似性。且兩者均含有多聚核苷聚合酶家族的特征性結(jié)構(gòu)域。基于以上各點(diǎn)，故認(rèn)為本發(fā)明的蛋白為多聚核苷聚合酶，命名為多聚核苷聚合酶-80.96。并以此推斷其與多聚核苷聚合酶相似，同為多聚核苷聚合酶家族的成員，并具有相似的生物學(xué)功能。該蛋白的在細(xì)胞內(nèi)通過(guò)與特異的轉(zhuǎn)錄起始因子結(jié)合，以調(diào)控相應(yīng)的RNA基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。該蛋白的突變或表達(dá)異常，將導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)相關(guān)RNA基因的轉(zhuǎn)錄異常，進(jìn)而引發(fā)各種相關(guān)的疾病。

由于如上所述多聚核苷聚合酶-80.96蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的多聚核苷聚合酶-80.96蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新多聚核苷聚合酶-80.96蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——多聚核苷聚合酶-80.96以及其片段、類(lèi)似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼多聚核苷聚合酶-80.96的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼多聚核苷聚合酶-80.96的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)多聚核苷聚合酶-80.96的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——多聚核苷聚合酶-80.96的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——多聚核苷聚合酶-80.96的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與多聚核苷聚合酶-80.96異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少75％相同性的多核苷酸。