[發明專利]一種多肽——三磷酸鳥苷酶激活蛋白－10.01和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105912.5
• 申請日: 2001-04-10
• 公開（公告）號: CN1380320A
• 公開（公告）日: 2002-11-20
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

人類的基因中有一些調控正常細胞的生長。Ras基因是其中的一個亞群，至少包括三個成員，N-ras，H-ras，以及K-ras2。Ras的變異形式，被稱為抑癌基因，它被認為是癌癥的病原體。Ras的正常細胞基因及抑癌基因都編碼化學相關的蛋白，總稱為rasp21蛋白。無論是正常的ras?p21與抑癌基因ras?p21蛋白，都與核苷酸，GTP及GDP結合，并把GTP緩慢水解為GDP。這種內在的GTP酶活性由細胞因子GAP刺激，其全稱為GTP酶激活蛋白，但它對抑癌基因變異相關的GTP酶活性不起作用。GAP是一種胞質蛋白，可從胞質轉入質膜與p21相互作用。由于它是活性ras的GTP結合形式，因而這些蛋白被稱為ras的負調節物。

GAP家族成員都是分子量較大的蛋白(從765個殘基至3079個殘基)，但相同的保守序列是一個有限的區域(約有250個殘基)，被稱為是“催化域”或rasGAP域。該區域中最為保守的區域是一段含有15個殘基的基序，它是該蛋白家族的特征序列：[GSN]-x-[LIVMF]-[FY]-[LIVMFY]-R-[LIVMFY](2)-[GACN]-P-[AV]-[LIV](2)-[SGAN]-P。

Ras蛋白在細胞內起著重要的信號作用并且Ras的突變活性形式經常與癌相關。在非活性的GTP與活性的GTP連接狀態中的循環的Ras由活性GTPase蛋白部分的調節，這能有效的刺激GTPases內在GTP水解活性。因此，人們得出結論GAPs的功能主要是作為媒介GTPase信號路徑的下調因子。

在哺乳動物中有兩個特殊的Ras的GAPs分別命名為p120GAP以及神經纖維瘤蛋白，它們是神經纖維瘤類型1腫瘤抑制基因的產物，并且已經定性了。我們分離出了一種人類DNA克隆體，它的蛋白中包含有與先前定性的RasGAPs的接觸反應主鏈相似的序列，這個蛋白被命名為IQGAP1。并且這個蛋白具有三個顯著的特性：它的氨基酸序列中48至161區域與果蠅肌肉蛋白MP-20有29％的相同性；IQGAP1蛋白包含四個銜接的命名為“IQ”的重復motif，它們大約有25到30個氨基酸序列的長度。這些片段在異亮胺酸和谷氨酸鹽的銜接位點中，以及肌球蛋白主鏈和神經蛋白的神經調質等蛋白中體現。這些motif在IQGAP1中的作用可能是為給鈣調路徑連接Ras信號服務的；最后，IQGAP1還包含六個具有相同序列的氨基酸motif，長度為50-60個氨基酸。本發明的多肽含有上述Ras?GTP酶激活蛋白的特征功能域，并且具有與Ras?GTP酶激活蛋白相似的生物學功能，因而被認為是一種Ras?GTP酶激活蛋白，為給鈣調路徑連接Ras信號服務的。若表達異常，則會影響細胞的增殖，并產生相關的疾病。

由于如上所述三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01蛋白在機體內重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與三磷酸鳥苷酶激活蛋白-10.01異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。