[發明專利]一種多肽——三磷酸腺苷合成酶－9.35和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105891.9
• 申請日: 2001-04-10
• 公開（公告）號: CN1380394A
• 公開（公告）日: 2002-11-20
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/68;A61K38/43
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——三磷酸腺苷合成酶-9.35，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

細胞活動的能量主要來自ATP。在動物細胞里，80％以上的ATP是在線粒體中合成的。線粒體通過呼吸鏈進行氧化磷酸化，將能量儲存在ATP中。在線粒體的內膜上分布著進行氧化磷酸化的各種酶系，其中一類是ATP合成酶。

ATP合成酶，或稱F0-F1ATPase是一個多組份的復合物，結構上分為三部分，即頭部、柄部和膜部。一般認為它由水溶性蛋白質F1和疏水性跨膜蛋白質F0所組成。F0構成了質子通道，而F1則是催化中心，它含有多種不同的肽鏈，由α、β、γ、δ、ε5種多肽組成，形成α₃β₃γδε結構。其中α、β可能是結合ATP/ADP或其他核苷酸的位點。具體地說，β鏈具有催化活性，而α鏈是一個調控位點。

在真核細胞中，液泡ATP合成酶(V-ATPase)可以酸化不同細胞內的區域。與F-ATP合成酶類似，V-ATP合成酶也包括一個跨膜區域和一個催化中心。催化中心的最大的亞基的蛋白序列與F-ATP的β鏈相似。

在原核生物、真核生物中都有ATP合成酶。在原核細胞中，如細菌中，ATP合成酶存在于質膜上，它包含一個親水的F1和一個疏水的F0；F1也具有α₃β₃γδε結構，α亞基也包含有ATP和ADP的結合位點。因此，ATP合成酶是氧化磷酸化的關鍵裝置，是生物膜能量轉換單位，不論是在線粒體、植物細胞的葉綠體和細菌的能量耦連反應中均起中心作用。ATP合成酶的α和β亞基的特征區域是：P-[SAP]-[LIV]-[DNH]-x(3)-S-x-S，第一個S殘基是催化活性中心，至少在α亞基中。此位點突變會導致不能正常催化。

由于如上所述三磷酸腺苷合成酶-9.35蛋白在機體內重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的三磷酸腺苷合成酶-9.35蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新三磷酸腺苷合成酶-9.35蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——三磷酸腺苷合成酶-9.35以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼三磷酸腺苷合成酶-9.35的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼三磷酸腺苷合成酶-9.35的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產三磷酸腺苷合成酶-9.35的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——三磷酸腺苷合成酶-9.35的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——三磷酸腺苷合成酶-9.35的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與三磷酸腺苷合成酶-9.35異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中266-523位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1745位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。

本發明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制三磷酸腺苷合成酶-9.35蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發明的多肽。本發明還涉及用該方法獲得的化合物。