[發明專利]一種多肽——人核蛋白20.24和編碼這種多肽的多核苷酸無效

申請號：	01105754.8	申請日：	2001-03-22
公開（公告）號：	CN1376701A	公開（公告）日：	2002-10-30
發明（設計）人：	毛裕民;謝毅	申請（專利權）人：	上海博德基因開發有限公司
主分類號：	C07K14/47	分類號：	C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種多肽核蛋白 20.24 編碼這種多核苷酸
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【說明書】：

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人核蛋白20.24，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

人核蛋白在轉錄，mRNA的加工，復制和染色體組織等許多細胞核事件中起作用。許多核蛋白有復雜的信號來介導通過核孔復合物的主動運輸。現在已經鑒定出負責選擇性的引入細胞核的主要序列，核定位信號(nuclear?localiztionsignals，NLSs)，以及其相關的受體，例如Kap蛋白家族。經典的NLS含有一個富含賴氨酸和精氨酸殘基的短片段。

運用酵母雙雜交系統，我們得到了一種鼠的cDNA(E3-3)。E3-3中含有一個558nt的開放閱讀框(ORF1)，它由一個連續的Kozak序列中的ATG開始。ORF1編碼蛋白的分子量為20683Da，其等電點為7.83。人與鼠的E3-3具有71％的同源性，但他們與數據庫中的任何其它蛋白均沒有同源性。

E3-3編碼一種新的蛋白，它在體內廣泛表達。E3-3有多種變體，不同的剪切方式導致了其編碼蛋白縮短方式的多樣性。睪丸是所有組織中唯一能夠優先表達最長蛋白變體的，其蛋白為20.6KD，將這一20.6KD變體用增強的綠色熒光蛋白標記，結果顯示此蛋白位于核仁內。20.6KD變體是睪丸核仁中的主要蛋白，這表明E3-3可能在睪丸的細胞核仁中占有重要地位。(Max-Planck?Institute?forPsychiatry，et.al，Biochim?Biophys?Acta，1997?Sep?12；1353(3)：224-30)

本發明的人的基因與鼠核蛋白基因E3-3在蛋白水平上有78％的同一性和86％的相似性。基于以上各點，故認為本發明的新基因為人核蛋白基因，命名為{人核蛋白20.24}。并以此推斷其與鼠核蛋白基因E3-3相似，同為核蛋白家族的成員，并具有相似的生物學功能。

由于如上所述人核蛋白20.24蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人核蛋白20.24蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人核蛋白20.24蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人核蛋白20.24以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人核蛋白20.24的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人核蛋白20.24的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人核蛋白20.24的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人核蛋白20.24的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人核蛋白20.24的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人核蛋白20.24異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；