[發明專利]一種多肽——帕內特細胞表達增強蛋白－43.78和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105732.7
• 申請日: 2001-03-22
• 公開（公告）號: CN1376684A
• 公開（公告）日: 2002-10-30
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——帕內特細胞表達增強蛋白-43.78，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

小腸主要是由四種分化細胞組成，柱細胞、帕內特細胞、腸嗜鉻細胞和杯型細胞。這些細胞被認為是由干細胞分化而來。帕內特細胞是一種末端分化細胞，是活性的分泌細胞，它是在小腸的小囊中的最低端區域中，是一種腸腺的嗜酸性細胞，常三五成群。胞質頂部充滿粗大嗜酸性顆粒，內含溶菌酶。帕內特細胞的具體功能現在還沒有明確的了解，但是有報道稱，它可能在抵擋微生物中發揮了作用，它合成類似EGF的生長因子以及增強型因子；類似鳥苷蛋白，防衛素(動物細胞的內源性抗菌肽)-5以及溶菌酶的抗微生物劑；其他類似alpha1-抗胰蛋白酶，腫瘤壞死因子以及角蛋白。帕內特細胞的基因在肝臟中以及胃腸道的各處表達，倘若這種細胞發生變異或缺失則可能會引起各種癌腫。(Cheng?H，Bjerknes?M，Anat?Rec?1996?Jan；244(1)：78-94；Komiya?T，Tanigawa?Y，HirohashiS.Biochem?Biophys?Res?Commun.1998?Oct?29；251(3)：759-62)

目前，有大量的研究關于小腸上皮細胞中小囊絨毛軸中的基因表達，尤其是腸小囊中已經表達的基因的辨認。在辨認小囊中表達的基因，發現可以分為三種，在小囊絨毛中到處都有表達的基因，在絨毛中受到限制表達的基因，和在小囊中受到限制表達的基因。將前兩種克隆，發現又進一步可以分為三種，表達水平始終如一的基因，表達水平逐漸減弱的基因，和表達水平逐漸增強的基因。(Cheng?H，Bjerknes?M，Anat?Rec?1996?Jan；244(1)：78-94)

本發明的多肽與鼠帕內特細胞表達增強蛋白在蛋白水平上有89％的同一性及92％的相似性，且具有相似的生物學功能，因而被認為屬于帕內特細胞的一種，命名為帕內特細胞表達增強蛋白-43.78。

由于如上所述帕內特細胞表達增強蛋白-43.78蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的帕內特細胞表達增強蛋白-43.78蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新帕內特細胞表達增強蛋白-43.78蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——帕內特細胞表達增強蛋白-43.78以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼帕內特細胞表達增強蛋白-43.78的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼帕內特細胞表達增強蛋白-43.78的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產帕內特細胞表達增強蛋白-43.78的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——帕內特細胞表達增強蛋白-43.78的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——帕內特細胞表達增強蛋白-43.78的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與帕內特細胞表達增強蛋白-43.78異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少76％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中108-1304位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1639位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。