[發明專利]一種多肽——人磷酸三脂酶－22和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105724.6
• 申請日: 2001-03-22
• 公開（公告）號: CN1376789A
• 公開（公告）日: 2002-10-30
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/55;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/34;C12Q1/68;A61K38/46
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人磷酸三脂酶-22，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

微生物的磷酸三脂酶是一類鋅金屬酶，它催化包括有機磷殺蟲劑和神經氣體的一系列磷酸三脂復合物的水解，如：對硫磷，對氧磷和薩林等。磷酸三脂酶可以對那些被有機磷污染的工業和農業廢物具有解毒功能，從而保護機體免受有機磷神經毒素的攻擊。

細菌磷酸三脂酶可以水解含有磷酸三脂的有機磷農藥。樹脂毒素是一種香草醛類似物，它可以使傷害性神經元不敏感。用樹脂毒素作標記，對一個小鼠的cDNA文庫進行熒光檢測，我們分離到了一種新的磷酸三脂酶的類似物，命名為rpr-1。體外翻譯結果證明，rpr-1基因編碼一個含349個氨基酸的蛋白，其分子量為39kDa。Northern印跡和原位雜交顯示，rpr-1主要在腎的近端小管中表達，rpr-1的分布與其和樹脂毒素結合的功能相關。研究結果顯示，磷酸三脂酶家族與樹脂毒素的毒性和藥理學方面有著不容置疑的聯系。(Jamie?A.Davies，et.al，FEBSLetters，410：378-382，1997)

本發明的人的基因與磷酸三脂酶基因rpr-1在蛋白水平上有87％的同一性和93％的相似性。基于以上各點，故認為本發明的新基因為磷酸三脂酶基因，命名為{人磷酸三脂酶-22}。并以此推斷其與磷酸三脂酶基因rpr-1相似，同為磷酸三脂酶基因家族的成員，并具有相似的生物學功能。

由于如上所述人磷酸三脂酶-22蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人磷酸三脂酶-22蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人磷酸三脂酶-22蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人磷酸三脂酶-22以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人磷酸三脂酶-22的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人磷酸三脂酶-22的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人磷酸三脂酶-22的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人磷酸三脂酶-22的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人磷酸三脂酶-22的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人磷酸三脂酶-22異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少88％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中189-791位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1630位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。

本發明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人磷酸三脂酶-22蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發明的多肽。本發明還涉及用該方法獲得的化合物。

本發明還涉及一種體外檢測與人磷酸三脂酶-22蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本發明多肽的量或生物活性。

本發明也涉及一種藥物組合物，它含有本發明多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。