[發明專利]肝癌高表達基因、其編碼的蛋白及其應用

無效

• 申請號: 01105508.1
• 申請日: 2001-02-28
• 公開（公告）號: CN1371917A
• 公開（公告）日: 2002-10-02
• 發明（設計）人: 王紅陽;王征旭;吳孟超
• 申請（專利權）人: 第二軍醫大學東方肝膽外科研究所
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/12;C12N15/63;C12P21/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所
• 代理人: 徐迅

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明涉及新的編碼人HCCA3蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸編碼的多肽。本發明還涉及此多核苷酸和多肽及其特異性抗體的用途和制備。具體地說，本發明的HCCA3蛋白是一種新的在肝癌中高表達的蛋白。

1986年著名生物學家諾貝爾獎獲得者Renato?Dulbecco在Science雜志上率先提出“人類基因組計劃”(Human?Genomic?Project，簡稱HGP)，該建議的提出引發了科學界長達三年的激烈爭論。1990年10月美國政府決定出資30億美元正式啟動“人類基因組計劃”，預期到2005年拿到人體的全部基因序列(共約30億個核苷酸全序列)；隨后研究其相互作用和基因功能，從而揭開人類全部遺傳信息之謎，使人類對自身的認識達到一個新的高度。

人類基因組計劃可以說是人類有史以來最為偉大的認識自身的世紀工程之一。1997年底，有人提出HGP的最終目標應該是提供生物學周期表，這個周期表的“元素”就是決定人類一切性狀的10-14萬個基因。完成30億個堿基的測序只不過為這個目標打下了結構上的基礎(即結構基因組學)，而比較基因組學(包括其編碼的蛋白質)和整個基因組的功能研究(功能基因組學)在基因組的價值發現上才能直接發揮其重要作用。隨著基因組學的發展，人們設計和創造了許多重要的生物分子，廣泛用于制藥、農業、食品、化工、化妝品、環境、能源等各領域，不僅會推動科學的進步，還將產生驚人的經濟效益，從而引發產業革命，以基因組學為基礎的生命科學工業已經形成。人類有限的基因資源正在做著一次性分配，獲取基因效率最高和數量最多的企業，有望利用其基因專利來壟斷未來生物和制藥工業市場。比爾.蓋茨曾說：下一個創造出更大財富的人將出現在基因領域。

隨著基因組計劃的迅猛發展，攻克包括肝癌在內的惡性腫瘤在不久的將來將成為現實。我國是原發性肝細胞肝癌(primary?hepatocellular?carcinoma，HCC)的高發地區，其死亡率已占我國部分農村和城市的第一、二位，是嚴重影響我國人民健康的重大疾病，每年世界上有38.6萬人死于肝癌，而其中的45％是在中國。目前認為，肝癌的發生、發展，亦和其它惡性腫瘤一樣，是多基因、多因素參與的復雜過程，包括體細胞基因突變、抑癌基因的丟失、癌基因的激活和過表達等等，許多癌基因、抑癌基因，及相關基因的異常激活或失活是肝癌發生的分子基礎。從理論上講，應該有更多的基因參與其中，但目前已發現的許多基因，其詳盡功能仍不十分清楚。目前已證明與人類肝癌相關的癌基因或異常表達基因包括：pTEN、p21、p27、p73、p15、p53、RB1、APC、nm23、P16、MXR7、IGF-II、TGFα、HGF-R(c-met)/HGF、c-fms(CSF-IR)、c-erbB-1(EGF-R)/c-erbB-2(neu)、Ras、Raf、c-myc、c-ets-2等等，但沒有一個為肝癌特異性表達基因，因此，尋找新的肝癌異常表達或缺失基因，從基因水平認識肝細胞的生長、分化、再生和癌變的分子機理，并闡明其信號傳遞過程與途徑，不僅有重要的生物學意義，而且對于肝癌的早期基因診斷和信息治療，均具有重大的臨床應用意義和經濟開發價值，在人類基因組的研究中也能占領新的制高點。

隨著分子生物學技術的迅猛發展，尋找、分離基因的新方法不斷出現，主要有以下四種：1、從cDNA或mRNA出發的方法：利用細胞基因表達的差異來分離致病基因是一類重要方法，目前進展較快。包括cDNA消減雜交法、mRNA差異顯示技術、EST(Expressed?sequence?tags)差異雜交篩選等；2、從分析蛋白質入手：根據蛋白的位置、結合特點或部分功能出發，先分離所需蛋白，再得到相應的基因。包括免疫沉淀法、雙向電泳法、酵母雙雜交系統法等；3、從尋找基因組DNA片段出發：尋找到與目標基因座位緊密連鎖的遺傳標記或部分功能信息，從而確定某性狀相關的基因在基因組中某區段的位置，然后再利用不同方法找到該區段染色體內的表達序列，最終克隆到目的基因。包括復雜探針篩庫法、Northern雜交法、剪接位點篩選法、CpG島篩選法、種間同源序列雜交法、PCR直選法、外顯子捕獲、一致序列克隆法等；4、從全基因組出發：根據有關基因的效應直接分離該基因的克隆，而不必事先探知其生化功能或圖譜定位，也不需要假設基因的數目或其相互作用方式，包括基因組錯配掃描及代表性差別分析等。上述尋找新基因的方法各有利弊，使用哪一種方法，應根據各自實驗室的條件與優勢，揚長避短，采取切實可行的方法。