[發明專利]具有抑制癌細胞生長功能的新的人蛋白及其編碼序列

無效

• 申請號: 01105310.0
• 申請日: 2001-02-08
• 公開（公告）號: CN1368509A
• 公開（公告）日: 2002-09-11
• 發明（設計）人: 顧健人
• 申請（專利權）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12P21/00;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所
• 代理人: 徐迅

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明涉及新的編碼具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸和此多核苷酸編碼的多肽。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的用途和制備。

人基因組學研究目前是國際上的熱點，除人染色體DNA大規模測序，表達序列測序(EST)的方法外，還缺少從功能開始的篩選具有功能基因的高通量的方法。

癌癥是危害人類健康的主要疾病之一。為了有效地治療和預防腫瘤，目前人們已越來越關注腫瘤的基因治療。因此，本領域迫切需要開發研究具有抑癌功能的人蛋白及其激動劑/抑制劑。

本發明的目的是提供一類新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一目的是提供編碼這些多肽的多核苷酸。

本發明的另一目的是提供生產這些多肽的方法以及該多肽和編碼序列的用途。

在本發明的第一方面，提供新穎的分離出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽：SEQ?ID?NO：2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

較佳地，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽：SEQ?ID?NO：2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32。

在本發明的第二方面，提供了一種分離的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相同性：(a)編碼上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。較佳地，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32。更佳地，該多核苷酸的序列選自下組：SEQ?ID?NO：3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33的編碼區序列或全長序列。

在本發明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體，以及被該載體轉化或轉導的宿主細胞或者被上述多核苷酸直接轉化或轉導的宿主細胞。

在本發明的第四方面，提供了制備具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制備方法，該方法包含：(a)在適合表達具有抑癌功能的蛋白的條件下，培養上述被轉化或轉導的宿主細胞；(b)從培養物中分離出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。

在本發明的第五方面，提供了與上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特異性結合的抗體。還提供了可用于檢測的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中連續10個核苷酸至全長核苷酸，較佳地它含有連續的約10-800個核苷酸。

在本發明的第六方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及藥學上可接受的載體。這些藥物組合物可治療癌癥以及細胞異常增殖等病癥。

本發明的其它方面由于本文的公開內容，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。

本發明采用大規模cDNA克隆轉染癌細胞，在獲得具有抑癌作用的基礎上，經測序證明為新的基因，進一步得到全長cDNA克隆。DNA轉染試驗證明，本發明的具有抑癌功能的蛋白對癌細胞(肝癌細胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。

如本文所用，“分離的”是指物質從其原始環境中分離出來(如果是天然的物質，原始環境即是天然環境)。如活體細胞內的天然狀態下的多聚核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態中同存在的其他物質中分開，則為分離純化的。

如本文所用，“分離的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然與其相關的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質。本領域的技術人員能用標準的蛋白質純化技術純化具有抑癌功能的蛋白。基本上純的多肽在非還原聚丙烯酰胺凝膠上能產生單一的主帶。

本發明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優選重組多肽。本發明的多肽可以是天然純化的產物，或是化學合成的產物，或使用重組技術從原核或真核宿主(例如，細菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動物細胞)中產生。根據重組生產方案所用的宿主，本發明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本發明的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。