[發明專利]新的肝再生相關蛋白、其編碼序列及用途

無效

• 申請號: 01105282.1
• 申請日: 2001-01-22
• 公開（公告）號: CN1367179A
• 公開（公告）日: 2002-09-04
• 發明（設計）人: 趙慕鈞;劉占武;李載平
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生物化學研究所
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12P21/02;A61K38/17;A61K31/7088;G01N33/68;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所
• 代理人: 徐迅

本發明屬于分子生物學和醫學領域，具體地說，本發明涉及新的編碼肝再生相關蛋白-LRTM4的多核苷酸，以及此多核苷酸編碼的多肽。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的用途和制備。具體地說，本發明的多肽是一種新的與肝再生有關的肝再生相關蛋白。

肝臟具有明顯的再生現象，肝臟部分切除后，或受到物理及化學損傷時，肝臟就開始再生，并且再生持續到肝臟與身體的比例到達一定值時終止。肝再生現象與多種肝臟疾病相伴隨，如肝硬化、急慢性肝炎等。肝癌的發生過程也往往伴隨有肝再生現象；同時，臨床上肝再生現象被應用于部分肝臟移植以及肝細胞移植。

肝癌是一種世界范圍內的惡性腫瘤，死亡率極高，尤其中國是肝癌的高發病區。每年世界范圍內有25萬人死于肝癌，我國占了其中的40％(李紹白，《肝臟病學》，人民衛生出版社，1995)。肝癌的發生與病毒感染如乙型肝炎病毒(hepatitis?B?virus，HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis?C?virus，HCV)感染有關，食用含有黃曲霉毒素等致癌物質的水和食物等都是肝癌發病的主要因素。目前還發現肝癌發生與肝臟再生有密切的關系：肝癌發生的過程往往伴有肝再生現象。現已知道，肝再生是受到緊密調控的肝細胞增殖，而肝細胞癌是肝細胞不受控制的增殖。現在有的學說認為，肝癌發生的過程包括肝臟被病毒或化學物質損傷，持續的損傷導致持續的再生，再生失去控制后便成為肝癌。所以了解肝癌與肝再生的關系，無疑有助于人們更好地對早期肝癌進行預測與治療。

目前，對于一些肝臟疾病的治療最有效的方案是肝臟移植，而且肝臟移植手術的技術已經比較成熟，但是每年能夠受益于這一技術的人數非常有限，這是因為目前的肝臟移植有兩個方面受到限制：供體來源和免疫排斥。要想使更多的人受益于肝臟移植，就必須突破這兩個限制。現在突破這個限制的主要策略是部分肝移植和肝細胞移植。部分肝移植可以使一個供體肝臟移植到兩個人或者更多，同時也使親屬間肝臟移植成為可能，從而減少了免疫排斥。另外一個更理想的方案是肝細胞移植，即將肝細胞直接移植進病人肝臟或者脾臟部位，肝細胞逐漸再生，承擔起肝臟的功能。肝細胞移植可以利用病人自己的肝細胞，從而不會發生免疫排斥現象；同時對病人肝細胞進行體外培養并導入特定的基因，能夠進行基因治療。

為了滿足部分肝移植及肝細胞移植等的需求，本領域迫切需要了解與肝組織再生有關的因素，尤其是與肝再生有關的基因和蛋白。

本發明的目的是提供一種新的肝再生相關蛋白-LRTM4蛋白以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一目的是提供編碼這些多肽的多核苷酸。

本發明的另一目的是提供生產這些多肽的方法以及該多肽和編碼序列的用途。本發明的LRTM4基因，是一個在國內外未見報道的新基因，對它的分子機制的研究有利于闡明肝臟再生的分子生物學機制，同時也可能用于肝臟疾病的基因治療。

在本發明的第一方面，提供新穎的分離出的LRTM4多肽，該多肽源自大鼠，它包含：具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

在本發明的第二方面，提供編碼分離的這些多肽的多核苷酸，該多核苷酸包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少75％相同性：(a)編碼上述LRTM4多肽的多核苷酸；和(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。較佳地，該多核苷酸編碼具有SEQ?ID?NO：2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中335-940位的序列；(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1576位的序列。

在本發明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體，以及被該載體轉化或轉導的宿主細胞或者被上述多核苷酸直接轉化或轉導的宿主細胞。

在本發明的第四方面，提供了制備具有LRTM4蛋白活性的多肽的方法，該方法包含：(a)在適合表達LRTM4蛋白的條件下，培養上述被轉化或轉導的宿主細胞；(b)從培養物中分離出具有LRTM4蛋白活性的多肽。

在本發明的第五方面，提供了與上述的LRTM4多肽特異性結合的抗體。還提供了可用于檢測的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中連續的15-1576個核苷酸。

在本發明的第六方面，提供了模擬、促進、拮抗LRTM4多肽活性的化合物，以及抑制LRTM4多肽的表達的化合物。還提供了篩選和/或制備這些化合物的方法。較佳地，該化合物是LRTM4多肽的編碼序列(或其片段)的反義序列。