[發(fā)明專利]一種新的多肽——鋅指蛋白14.52和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 01105175.2
• 申請日: 2001-01-10
• 公開（公告）號: CN1364798A
• 公開（公告）日: 2002-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——鋅指蛋白14.52，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

鋅結(jié)合蛋白通常作為轉(zhuǎn)錄因子及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子參與基因的表達(dá)與調(diào)控，這類蛋白構(gòu)成了一個(gè)很大的蛋白家族，被稱為鋅指蛋白。一個(gè)鋅原子結(jié)合結(jié)構(gòu)域通常由25到30個(gè)氨基酸殘基組成，這些氨基酸殘基組成了一個(gè)或多個(gè)原子結(jié)合位點(diǎn)。鋅原子的結(jié)合使蛋白折疊成一定的結(jié)構(gòu)單位，這些結(jié)構(gòu)能很好的適應(yīng)大分子間的相互作用(Berg，J.M.et?al.，1996，Science，271：1081-1085)。研究發(fā)現(xiàn)，鋅指蛋白在不同的生物的各種組織中均有表達(dá)，這些組織包括造血細(xì)胞、腦、神經(jīng)系統(tǒng)、各種與腫瘤相關(guān)的組織和無限增殖細(xì)胞系組織等。其在這些組織的基因表達(dá)過程中均起著極為重要的調(diào)節(jié)作用。

所有的鋅指蛋白均含有保守的鋅指結(jié)構(gòu)，鋅指結(jié)構(gòu)主要有兩類：C2H2型及C2C2型，此外，還有一類鋅指結(jié)構(gòu)在酵母的基因活化因子發(fā)現(xiàn)的，2個(gè)Zn原子緊密靠在一起與6個(gè)Cys配合，形成一個(gè)“鋅簇”核心的結(jié)構(gòu)。其中以C2H2型分布最為廣泛。

C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)域，即Zn原子與2個(gè)Cys、2個(gè)His殘基結(jié)合(C2H2)，在這類鋅指單元中有一段相對較為保守的序列：(Tyr，Phe)-X-Cys-X(2，4)-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X(3，5)-His(其中X表示任意氨基酸殘基；半胱氨酸與組氨酸與鋅原子形成配位鍵，結(jié)合鋅原子；其它三個(gè)保守的氨基酸殘基形成疏水性中心區(qū)域；其它變化的氨基酸殘基負(fù)責(zé)介導(dǎo)蛋白與其它的分子的相互作用)。在鋅指蛋白中，Zn的作用是使蛋白質(zhì)分子形成指型構(gòu)象的骨架與DNA結(jié)合。鋅指結(jié)構(gòu)在許多與“蛋白-核酸”和“蛋白-蛋白”相互作用有關(guān)的蛋白里都存在。一個(gè)鋅指蛋白可能含有一個(gè)或多個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域在生物體內(nèi)獨(dú)立完成自己的功能。在很多情況下，含有鋅指結(jié)構(gòu)域的蛋白與特殊的雙鏈及單鏈DNA序列相互作用，起著轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子及信號傳遞因子的作用。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，C2H2類型的鋅指結(jié)構(gòu)域不僅在一些組織的基因表達(dá)過程中起重要的調(diào)節(jié)作用，且其在發(fā)育調(diào)節(jié)及一些組織腫瘤的形成過程中也起著關(guān)鍵的作用。

C2H2型鋅指蛋白按其結(jié)構(gòu)特征還可分成各種不同的家族。Kruppel型鋅指蛋白在生物體內(nèi)即形成了獨(dú)立的家族，該家族的成員均含有鋅指蛋白家族保守的鋅指基序，且各基序間由保守的H/C連接區(qū)域連接在一起，該區(qū)域含有保守的氨基酸序列：TGEKPY/F[Schuh?R.，Aicher?W.Et?al.，Cell，1986，47：1025-1032]。此外，Bellefroid等人于1991年就指出，該家族中約有三分之一的成員在其N末端還含有一由75個(gè)氨基酸組成的保守基序，并將此基序命名為KRAB(Kruppel-associated?box)結(jié)構(gòu)域。該結(jié)構(gòu)域?yàn)殇\指蛋白N末端與DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，在進(jìn)化上高度保守[Judith?F.Margolin?et?al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91：4509-4513]。該結(jié)構(gòu)域被分為A、B兩個(gè)盒結(jié)構(gòu)，其中富含變化的氨基酸殘基，形成兩個(gè)親水性螺旋。鋅指蛋白KRAB亞家族中的成員有些同時(shí)含有KRAB?A-盒及KRAB?B-盒，而有些僅含KRAB?A-盒。研究發(fā)現(xiàn)，KRAB結(jié)構(gòu)域?yàn)橐粷撛诘霓D(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域，其中由45個(gè)氨基酸組成的親水性螺旋片段為轉(zhuǎn)錄抑制所必須的，螺旋結(jié)構(gòu)中氨基酸的替換將減弱蛋白對轉(zhuǎn)錄的抑制功能，從而導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的失調(diào)及引發(fā)各種發(fā)育及惡性紊亂相關(guān)的疾病[N.Tommerup?et?al.，Genomics，1995，27：259-264]。同時(shí)，KRAB結(jié)構(gòu)域與第一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)間也含有一保守的連接區(qū)域，該區(qū)域至少含有一個(gè)核酸定位信號，該信號與蛋白的正確定位及發(fā)揮功能有關(guān)。

由于如上所述鋅指蛋白14.52蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的鋅指蛋白14.52蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新鋅指蛋白14.52蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——鋅指蛋白14.52以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼鋅指蛋白14.52的多核苷酸的重組載體。