[發明專利]一種新的多肽——人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105165.5
• 申請日: 2001-01-10
• 公開（公告）號: CN1364789A
• 公開（公告）日: 2002-08-21
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02;A61P43/00
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

谷氨酸的重吸收在突觸調節和細胞外谷氨酸調節中起重要作用。谷氨酸在中樞神經系統和周圍神經系統中的轉運主要由一類跨膜蛋白來介導完成，這類蛋白被稱為谷氨酸轉運蛋白。在人腦主要存在三種谷氨酸轉運蛋白，EAAT1、EAAT2及EAAT3。這三種轉運蛋白在整個人腦中均廣泛存在，其中EAAT1在小腦中表達最高；EAAT1和EAAT3在許多非神經組織中也有發現；而EAAT2則主要局限于在腦中表達。

研究發現，谷氨酸轉運蛋白在轉運谷氨酸時，運入1分子的谷氨酸和2個單位的鈉離子，同時運出一個單位的鉀離子，從而形成一個單位的凈正電荷。這一電荷轉移過程是電壓倚賴的，隨著轉運底物激活的氯離子的轉運而發生。不同類型的轉運蛋白轉運谷氨酸和轉運氯離子的比例不同。由此可知，該三種谷氨酸轉運蛋白在生物體內具有相似的生物學功能，均參與調控體內谷氨酸殘基的重吸收及一些相關的神經系統的功能表達[Jeffrey?L.Azziza，Wendy?A.Fairman?etal.，1994，J?Neruosci，14：559-69]。

在人體內不同的谷氨酸轉運蛋白具有不同的藥理性質，許多能夠抑制谷氨酸轉運的化合物(如絲氨酸-O-硫酸、L-反式-四氫吡咯-2，4-二羧酸、L-半胱氨酸和D-精氨酸等)也能誘發內向電流，它們作為谷氨酸轉運的競爭性底物調控著這一轉運過程的進行。相反，鉀鹽鎂礬和二氫鉀鹽鎂礬這兩種谷氨酸的類似物可以選擇性、競爭性的阻礙EAAT2對谷氨酸轉運，但它們本身并不會被轉運。這一阻礙過程不是電壓倚賴型的。這說明鉀鹽鎂礬與EAAT2的結合部位位于膜電場之外。而EAAT1和EAAT3則對這兩種類似物并不敏感。

由上可知，谷氨酸轉運蛋白在生物體內主要負責調控神經系統谷氨酸殘基的轉運過程，該蛋白的突變或表達異常通常將導致神經系統的功能異常，進而引發各種相關的疾病。谷氨酸轉運蛋白在生物體內通常與一些神經系統的發育紊亂性疾病等的發生密切相關。該蛋白還可用于診斷及治療上述各種相關的神經系統疾病。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與人興奮性氨基酸轉運蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53。

由于如上所述人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人興奮性氨基酸轉運蛋白13.53異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。